Spectrophotometrie

Par Benadjal, Younes Nguyen, Marcus Vo, Eric Gr. : 05 Enseignant : Sofiane Bechaouch Remis le 14 avril 2015 But Ce laboratoire a pour but d’étudier le déplacement d’un équilibre vers le sens direct ou indirect. Aussi, à l’aide de la spectrophotométrie, on veut déterminer la constante d’équilibre K de la réaction d’un indicateur bleu de bromophénol. Cadre théorique 1. Écrire l’équation de l’équilibre s’établissant dans l’eau entre les formes HIn et In– d’un indicateur coloré. HIn(aq)

pH optimum pour l’enzyme α-amylase en étudiant la réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH But : Montrer et déterminer la valeur d’un pH optimum spécifique à l’enzyme α-amylase. Pour se faire on étudie son activité enzymatique par spectrophotométrie dans une réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH. Calcul de concentration en amidon en mol/L : Ci × Vi = Cf × Vf Vi = ((1 × 100 × 10⁻⁶) )/25 = 4 × 10⁻⁶ 4 μL à prélever pour une concentration 1g/L [amidon]

Dans cette expérience, il fallait déterminer les différents paramètres de l’équation de vitesse de réaction entre le bleu bromophénole (tétrabromophénolsulphonphtaléïne) et l’hydroxyde de sodium. Pour ce faire, il a fallu utiliser la technique spectrophotométrie, c’est-à-dire déterminer l’absorbance des solutions (capacité de laisser passer la lumière à travers de la solution à une longueur d’onde et une calibration précise) à des temps précis. Ces valeurs étant proportionnelles à la concentration de

Contrôle avec une solution d’holmium. A affiché est elle exact ? (Bichromate de potassium) 13 Exemple d’application et méthode de dosage • Dosage des protéines : - Biuret - Bradford - Folin-Lowry - Absorbance à 280 nm : spectrophotométrie UV • Dosage des acides nucléiques : Absorbance à 260 nm, spectroscopie UV. • Différentes méthodes de concentration d’échantillon : Premier cas : on connaît ε. Problème : ε varie selon les conditions opératoires (pH, solvant…) C’est cependant

centrifugeuse la deuxième solution S2, ce qui est plus efficace qu'une décantation. III – Dosage du phosphate III – 1 : Objectif Le but de cette manipulation est, de former un complexe (solution) dans lequel le phosphate est dosable par spectrophotométrie, puis de réaliser le dosage (colorimétrique), afin de calculer, la teneur en phosphate de la plante et de la terre et de les comparer, via l'absorbance. III – 2 : Méthode expérimentale Premièrement, on prépare notre réactif de sulfomolybdique

déterminé de façon expérimentale et ne peut pas être calculé autrement. D’abord, afin de pouvoir mesurer une vitesse d’une réaction, la variation dans les concentrations pendant une réaction doit être observée à l’aide d’un phénomène appelé la spectrophotométrie. Celle-ci est l’étude de l’interaction entre la matière et son rayonnement électromagnétique; un spectrophotomètre est servi pour étudier ce phénomène. Lors de l’expérience, il y a quelques données essentielles à l’expérience qui sont déterminées

lorsque l'enzyme est mise en présence du substrat. Pour des raisons de commodité, ce dernier est le p-nitrophényl phosphate (PNPP), composé incolore qui libère par hydrolyse du p-nitrophénol (PNP) jaune en milieu alcalin et dosable directement par spectrophotométrie à 410 nm. NO2 OPO32- H2O NO2 OH HPO42- PNPP incolore PNP jaune λ max= 410 nm La densité optique de la solution à 410 nm est proportionnelle à sa consommation en PNP, une gamme étalon établie à partir de concentrations

pour éviter une mauvaise concentration des tubes. Préparation échantillon d'hydrolysat : Pipeter 1 mL de solution mère d'hydrolysat de caséine (tube 6) et 0,5 mL de la même solution avec 0,5mL d'eau distillé (tube7). Préparation pour la spectrophotométrie : Préparer ces tubes sur la paillasse (au total 8 tubes, y compris le tube témoin), et prélever 500 μL de chaque tube et les placer chacun dans un autre tube. Puis ajouter les composés suivant le plus rapidement possible dans tous les tubes

 La spectrophotométrie UV est une méthode d'analyse quantitative de substances simples ayant un large domaine d'usage.Elle est basée sur la propriété de la matière, et plus particulièrement de certaines molécules, d'absorber certaines longueurs d'ondes du spectre UV-visible. Elle permet de réaliser des dosages grâce à la loi de Beer-Lambert qui montre une relation de proportionnalité entre l'absorbance et la concentration, aussi bien qu'une étude structurale des complexes par l'étude

L’activité 1 Fabrication de matières colorées répond à la compétence : « Pratiquer une démarche expérimentale mettant en œuvre une extraction, une synthèse, une chromatographie » ; l’activité 2 Absorbance d’une solution introduit les techniques de spectrophotométrie et travaille la compétence « Interpréter la couleur d’un mélange obtenu à partir de matières 32 LIVRE DU PROFESSEUR 5908_LDP_Chap04.indd 1 13/09/11 15:48:13 colorées. ». L’activité 3 Mesure de la concentration d’une espèce colorée