Spectrophotometrie

L’activité 1 Fabrication de matières colorées répond à la compétence : « Pratiquer une démarche expérimentale mettant en œuvre une extraction, une synthèse, une chromatographie » ; l’activité 2 Absorbance d’une solution introduit les techniques de spectrophotométrie et travaille la compétence « Interpréter la couleur d’un mélange obtenu à partir de matières 32 LIVRE DU PROFESSEUR 5908_LDP_Chap04.indd 1 13/09/11 15:48:13 colorées. ». L’activité 3 Mesure de la concentration d’une espèce colorée

μg/ml ➢ Préparation des produits de réaction : 2,6 dichlorophénolindophénol ou DPIP (représenté par A dans la réaction suivante) est l’accepteur d’électrons exogène utilisés pour la réaction de Hill car le plus adapté à la spectrophotométrie (cf. PRAT R.) : H2O + A + chloroplastes + lumière ---------- > AH2 + 1/2 O2 + 2 e- Le DPIP à l’état oxydé est de couleur bleue alors qu’il est incolore à l’état réduit. Il est associé aux chloroplastes dans différents tubes selon les

l'enzyme est mise en présence du substrat. Pour des raisons de commodité, ce dernier est le para-nitrophényl phosphate (pNPP), composé incolore qui libère par hydrolyse en milieu alcalin du p-nitrophénolate (pNP) jaune et dosable directement par spectrophotométrie à 410nm. pNPP incolore pNP jaune (dosable à max= 410nm) La densité optique de la solution à 410 nm est proportionnelle à la production de pNP, une gamme étalon établie à partir de concentrations (ou quantités) connues de pNP permettra donc

(ONP-OH) est convertie en ion orthonitrophénolate (oNPO-) ; ion dont la solution est fortement colorée en jaune et présente un maximum d’absorption à 420 nm. Ce changement de coloration est très utile pour les suivis spectrophotométriques. La spectrophotométrie est une méthode extrêmement courante qui consiste à mesurer l’absorbance d’une substance chimique donnée, généralement en solution. Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière dans les limites de proportionnalité énoncées par

laverie …………………………………………55 I.1. Introduction ……………………………………………………………………….55 I.1.2. Les analyses chimiques d’un échantillon de la couche C2 ……………………55 a. Dosage de la silice (SiO2) par gravimétrie………………………………………….55 b. Dosage du Cadmium par spectrophotométrie d’absorption atomique …………..56 Chapitre III : RESULTATS ET DISCUSSION I. Résultats de l’étude critique de la laverie (Flow sheet) …………………………….60 I.1. Caractéristiques du produit brut ……………………………………………….60 I.2. Débourbage

priorité, vous pourrez faire les autres chez vous et les faire vérifier par l’enseignant. Il est demandé d'apporter son cours en séance de TD. Thème 1 : Concentrations-Dosages (en 2 séances) Concentration : à faire en priorité : exo n° 1,2,3,4. Spectrophotométrie : à faire en priorité : exo n° 2, 3 et 4 (bien le détailler) Thème 2 : Glucides (en 2 séances maxi) à faire en priorité : exo n° 2, 3, 4 et 5. Thème 3 : Acides Nucléiques (en 1,5 séance) à faire : exo n° 1,2,3. Thème 4 : Protéines (en 5 séances

NOTIONS FONDAMENTALES DE CHROMATOGRAPHIE Marie­Paule Bassez http://chemphys.u­strasbg.fr/mpb PLAN 1.  Introduction 2.  Grandeurs chromatographiques 2.1 Rapport de distribution K du soluté       2.2 Thermodynamique de la chromatographie 2.3 Temps de rétention du soluté 2.4 Facteur de rétention 2.5 Facteur de sélectivité ou de séparation 2.6 Courbe de Gauss 2.7 Résolution des pics 2.8 La théorie des plateaux 2.9 La théorie cinétique 2.10 Exemple d'application Bibliographie 1. Introduction

1.2) Loi de Beer-Lambert Elle permet de déterminer A grâce à la relation empirique suivante : A = ! (")!C C : concentration ( mol.L-1 ) dans un solvant non absorbant ou dont l’absorption est compensée. ! : coefficient d’extinction molaire du soluté. ! : longueur de la cuve (cm). ! dépend de la substance absorbante, de la longueur d’onde du faisceau ! et de la température. La loi de Beer-Lambert est une loi limite, valable si la solution est diluée et si on se place à

8/Fonctionnement d’un spectrophotomètre L'absorbance sert à mesurer la capacité d'un milieu donné à absorber une lumière qui le traverse. Elle dépend essentiellement de la longueur d’onde de cette lumière. L'absorbance est donc mesurée expérimentalement à l'aide d'un spectrophotomètre. Un spectrophotomètre permet de mesurer la lumière absorbée par une solution à une certaine longueur d’onde donnée. Grâce à cela, on peut donc en déduire la concentration. C : Concentration Massique C= m/

Titre : Dosage de solutions d’orange de méthyle Buts : Utiliser correctement la pipette et la fiole jaugée pour préparer les solutions de concentrations différentes d’orange de méthyle ainsi que le spectrophotomètre pour déterminer l’absorbance des solutions. Déterminer la concentration des solutions d’orange de méthyle inconnues #91 et #115 à l’aide d’une courbe d’étalonnage avec la meilleure précision possible. Théorie : La méthode, utilisée pour réaliser cette expérience, consiste à établir