Spectrophotometrie

COMPTE-RENDU de Chimie CONSTANTE D’ACIDITE D’UN COUPLE ACIDE-BASE Domaines de prédominance des formes acide et basique d’un indicateur coloré en solution aqueuse : le bleu de bromothymol Objectifs : ← Réinvestir la méthode d’analyse par spectrophotométrie pour déterminer, en fonction du pH, les domaines de prédominance d’un indicateur coloré acido-basique. Matériels : ← spectrophotomètre ← pH-mètre étalonné ← eau distillé ← burette graduée de 20 mL ← pipette

ECOLE MINES SAINT-ETIENNE DES ECOLE MINES SAINT-ETIENNE DES METHODES SPECTROMETRIQUES D'ANALYSE ET DE CARACTERISATION Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE MINES SAINT-ETIENNE DES SPECTROPHOTOMETRIE UV-VIS Page 2 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE MINES SAINT-ETIENNE DES Page 3 Axe " Génie des Procédés", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne ECOLE MINES SAINT-ETIENNE

protéines sont récupérées dans les fractions lors des différents lavages. A l'aide du tampon d'élution, dont le pH est sensiblement égal à la valeur du pHi du lysozyme, celui ci devient neutre, et est alors élué, et récupéré dans les éluats. Spectrophotométrie : Pour doser une molécule, c’est-à-dire connaître sa concentration en solution, la solution est placée sur le trajet d’un rayonnement électromagnétique d’une longueur d’onde fixe telle qu’il peut être absorbé par la molécule. Dans ces conditions

constituée de grains d’une silice greffée d’un motif hydrocarboné apolaire en C18 (polarité de phase inversée). La phase mobile est un mélange polaire méthanol/eau utilisé en élution isocratique ou gradient. L'éluat est suivi en continu par spectrophotométrie à 272 nm. Le dosage est possible par la méthode de l'étalonnage externe, par la méthode des ajouts dosés, après extraction liquide/liquide et utilisation d'un étalon interne. C1. Préalable Il s'agit essentiellement de justifier le réglage

système d'anticorps secondaire va amplifier le signal. On laisse incuber et on lave les puits pour éliminer l'excès. Enfin on dépose dans chaque puits le substrat de l'enzyme. Cela va donner un produit coloré qui absorbe à 410 nm. Par spectrophotométrie on va lire l'absorbance dans les différents puits. Méthodes d'expérimentation Nous disposons d'une solution mère de BSA 10% pour la sensibilisation des puits qu'il faut diluer au 100ème avec un tampon carbonate 0,1 M pour obtenir une

protéines, pigments. Il empêche l'absorption des éléments minéraux sur les structures cellulaires. Le précipité est éliminé par centrifugation, ce qui va nous permettre de récupérer le surnageant appelé F après filtrage, et de doser le phosphate par spectrophotométrie et le potassium par photométrie d'émission de flamme. - Extraction des éléments minéraux de la terre La terre mise en suspension dans l'eau, va nous permettre de « détacher » les minéraux facilement solubles de la terre nous servant de

pas sur les effets des emballages en aluminium. D’après un article de Wikipédia Les normes actuelles tolèrent une concentration maximale en aluminium de 7,4 µmol.L–1 pour l’eau potable. Le but de cet exercice est d’exploiter une analyse par spectrophotométrie afin de s’assurer qu’un échantillon d’eau vérifie ce critère. 1. Préparation de la solution S0 On prépare 1,00 L d’une solution mère de concentration 8,15 mmol.L–1 en élément aluminium à partir de chlorure d’aluminium hexahydraté AlCl3, 6H2O

Classe de TS TP de Chimie N° 3 ABSORBANCE ET CINETIQUE CHIMIQUE Objectifs : 1- Faire le suivi d'une réaction chimique par spectrophotométrie 2- Passer de l'absorbance d'une solution à la concentration d'une espèce (loi de Beer – Lambert) 3- Déterminer graphiquement la vitesse d'une réaction à partir de la courbe de l'absorbance en fonction du temps 4- Etudier l'influence de la concentration initiale des réactifs sur la vitesse d'une réaction 1. Solutions utilisées • Solution S1

BUT Nous allons déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme en étudiant l’influence de la concentration en substrat et celle de la présence d’un inhibiteur dans le milieu réactionnel. On va mesurer l’activité de l’enzyme en mesurant par spectrophotométrie l’apparition du produit de la réaction qui sera coloré. PRINCIPE Nous allons utiliser dans ce TP la phosphatase alcaline de veau. C’est une enzyme à 2 substrats qui à un pH optimal alcalin et qui hydrolyse les monoesters phosphoriques

les pores et ce sera donc la seconde fraction éluée . Étant donné que les protéines ont un maximum d'absorbance à 280 nm dû aux aminoacides aromatiques et que le cytochrome c de couleur rouge est visible à 409 nm , on peut déterminer par spectrophotométrie la concentration de chaque fraction de notre mélange inconnu en utilisant le coefficient d'absorbance de solution protéique pure . METHODE : Gel utilisé : Sephadex G-50, domaine de fractionnement : 1500-30000. Eluant utilisé : tampon