Protéine phosphatase

TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES TRAVAUX PRATIQUES SUJET 21 Durée : 7 heures Coefficient : 9 BIOCHIMIE (8 points) Durée : 3 heures DETERMINATION DES CONSTANTES CINETIQUES KM et Vmax D’UNE ENZYME L’enzyme étudiée est la phosphatase alcaline. On utilise la cinétique d’hydrolyse du PNPP (paranitrophényl phosphate) à 30°C et à pH = 9,8. PNPP + H2O ----------------- PNP + Phosphate Le PNP (paranitrophénol) jaune en milieu alcalin est dosé par photométrie d’absorption moléculaire

Phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate (Ptd Ins(3,4,5)P3) . Ce dernier va former un site de fixation membranaire pour la serine/thréonine kinase Akt (ou protein kinase B) activée par phosphorylation. Parmi les 3 isoformes d’Akt, l’Akt 1 activé va être responsable de l’hypertrophie du muscle squelettique (Glass, 2003) par l’activation de protéines (dont mTOR (mammalian Target Of Rapamycin)) qui vont stimuler la traduction protéique, la transcription génique et la prolifération myoblastique. En outre

ÉTUDE CINÉTIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DÉTERMINATION DU pH OPTIMUM BUT: Connaître les caractéristiques de la phosphatase alcaline tels que la Vm, le Km et le pH optimum. Lors de ce T.P. On étudiera donc les propriétés phosphatase et alcaline de cette enzyme. Une phosphatase est une enzyme qui hydrolyse un monoester phosphorique et forme un phosphate et un alcool ou un phénol: R-O-PO32- + H2O → R-OH + HPO42- Pour connaître le Vm et le Km de cette enzyme, on a besoin

Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000 UI/L 0,5 . 10-3 L x 30 min • L’activité d’une enzyme du sérum est de 3500 UI/L

DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE D'UNE REACTION ENZYMATIQUE COURBE [P] = f (t) I. PAR METHODE CINETIQUE L'enzyme étudiée est la phosphatase alcaline qui catalyse l'hydrolyse des liaisons esters lorsque l'acide engagé est l'acide phosphorique mono estérifié. On utilise la cinétique d'hydrolyse du PNPP (ParaNitroPhényl Phosphate) à 20°C à pH=9,8. Le PNP (ParaNitroPhénol) est jaune en milieu alcalin. On peut donc suivre l'apparition du PNP au cours de l'hydrolyse en enregistrant l'absorbance

connaitre tout la biologie (1 gène=1protéine) Accroc à cette théorie : l’épissage alternatif : mécanisme permettant de générer plusieurs protéines à partir d’un gène unique. Grand répertoire de protéines différentes. Changement de technologie : spectrométrie de masse : permet de connaitre la masse et la composition exacte des protéines. D’abord application aux protéines abondantes (histones, hémoglobine…) Grande variété de modifications post-traductionnelles : glycosylation, acétylation, hydroxylation

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

noyau (F1), le cytosol et les microsomes (F2), les mitochondries (F3), l’ensemble du système endomembranaire (F4) et le cytosol contenant les protéines solubles (F5). Lors du TP, les différentes fractions ont été soumises à différents dosages d’activités enzymatiques telles que l’activité de lactate déshydrogénase, l’activité de la glucose-6-phosphatase, l’activité de la cytochrome C oxidase. Ces dosages nous ont permis de mettre en évidence la localisation subcellulaire de l’enzyme dosée.

avec les protéines chimères indiquent que chacun des ces segments est un segment transmembranaire et définissent leur organisation dans la membrane. Les chimères entre les segments 1 et 2 (plasmides 1 et 2) ont une activité phosphatase alcaline élevée, indiquant que la phosphatase alcaline est dans l’espace périplasmique. Ces résultats montrent que le segment 1 sert de peptide de début de transfert, son extrémité N-terminale faisant face au cytoplasme et son extrémité C-terminale (phosphatase alcaline)

présent apparaissaient sous forme de filaments dispersés dans le noyau, se condensent et forment des paires de bâtonnets reliés entre eux au niveau du centromère. L'enveloppe du noyau se dissout (ceci étant dû à un phénomènes de phosphorylation de protéines situés à la face interne de la membrane nucléaire : les lamines nucléaires ; on retrouve alors des fragments de membrane nucléaire sous forme de vésicules baignant dans le cytoplasme) et deux centrosomes (qui avaient été répliqués peu avant, dès