Substrat enzymatique

la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction. La phosphatase alcaline

 UE 1 Biochimie M. CHIKH 17 pages Enzymologie I. POUVOIR CATALYTIQUE ET CINETIQUE 2 I.A. Généralités 2 I.B. Catalyse enzymatique 3 I.C. Cinétique enzymatique 5 II. REGULATION DE L'ACTIVITE 10 II.A. Régulation par modifications covalentes 10 II.B. Régulation par allostérie 11 III. MESURE DE L'ACTIVITE 13 III.A. Principe 13 III.B. Conditions expérimentales 13 III.C. Modalités de mesure 14 III.D. Résultats 15 III.E. Intérêt médical 15 IV. ISOENZYMES 15 V. COENZYMES ET VITAMINES 16 V.A. Principes

concentration en A. Cinétique enzymatique: 2 Mise en évidence d'un complexe discret qui explique le graphique et la réaction enzymatique. Comment une enzyme accélère une réaction ? elle diminue l'état de transition Sans enzyme le diagramme énergétique d'une réaction est (fig.1). Pour passer de S à P il faut franchir l'énergie d'activation ΔGact. 3 L'enzyme catalyse une réaction car elle forme un complexe enzyme-substrat et qu'elle stabilise l'état de

l'environnement. prob:Quelles sont les particularités des enzymes et comment interviennent-elles dans la réalisation du phénotype ? Plan:I)Les enzymes des biocatalyseurs II)La relation entre l'enzyme et son substrat III)L’influence de l’environnement sur le fonctionnement enzymatique IV) Realisation du phénotype 1°Les enzymes partagent les caractéristiques générales des catalyseurs chimiques : -Elles sont retrouvées intactes à la fin de la réaction. De ce fait, elles n'apparaissent pas

Protocole expérimental Partie 3 - Chapitre 1 La catalyse enzymatique Une transformation catalysée par les enzymes Le suivi plus précis de la réaction enzymatique au cours du temps p. 167 ◾◾Matériel • Comprimé d’amylase • Empois d’amidon à 1 g.L1 • Solution d’eau iodée • Compte-goutte • Fiole jaugée 50 mL • Pilon et mortier • Cuve de spectroscopie • Interface EXAO avec turbidimètre ou colorimètre ◾◾Préparation Solution enzymatique - Broyer le comprimé d’amylase à l’aide du pilon et du mortier

cinétique de l’enzyme phosphatase alcaline en fonction de la concentration en substrat et de déterminer son pH optimum (pH pour lequel l’enzyme à la vitesse de catalyse la plus rapide). II. Principe. Afin de suivre la réaction enzymatique, réalisation de dosages spectrophotométriques des produits apparus dans le milieu, quand l’enzyme est en présence de son substrat. Pour le dosage, nous allons utiliser comme substrat le P-nitrophénolphosphate (PNPP) qui, après action de l’enzyme, libère un produit

enzymes participent à: •Synthèses de molécules biologiques L acides aminés; exhausteurs de goût etc…. •Technologie alimentaire (viande; lait; fromage, boissons etc….) •Elaboration de nouvelles techniques analytiques (électrodes et capteurs enzymatiques) pour détection et dosage immédiat et donc de contrôle en temps réel d’un produit donné L’avenir des enzymes sera plus prometteur Dès que la protéine sera : plus efficace, plus stable , et d’une durée de vie plus longue ce qui nous conduit

Cinétique enzymatique Mesure de l’activité enzymatiqaue Dr AKSAS 1 Cinétique enzymatique La R enzymatique peut être subdivisée en 3 étapes: 1. Phase préstationnaire; 2. Phase stationnaire; 3. Phase post-stationnaire. 2 Cinétique Michaelienne Représentons les vitesses initiales de R en fonction des concentrations du substrats 3 Cinétique Michaelienne  Les vitesses mesurées croissent en fonction des concentrations du substrat.  Mais cette relation n’est pas linéaire :

à un catalyseur pour les accélérer et ainsi, pouvoir les mesurer. On donne le nom de « réaction enzymatique » à ces réactions, dont le processus est accéléré par une enzyme. Or, cette expérience enzymologique étudie l’effet que peut avoir la concentration d’enzyme sur la vitesse de la réaction. De plus, on tente d’élucider l’effet du pH sur la réaction ainsi que l’effet de la concentration du substrat. Pour ce faire, on s’appuie sur les équations et les graphiques de Michaelis-Menten et de Lineweaver-Burk

Exercice 1 Exercice enzymologie Pour l’étude d’une poudre A possédant une activité enzymatique, on en dissout 0,1 g dans une solution tampon convenable et on complète à 10 ml, on obtient ainsi la solution B. Les mesures d’activités enzymatiques sont effectuées après dilution de 1 ml de solution B dans 9 ml de solution de substrat (S). La concentration en substrat dans le milieu réactionnel est de 10 Km (Km = 1 mmol.L-1) [P] (µmol.L-1) 10 5ème année de Pharmacie 2010-2011 K. CHIKH 8 6 4 2 0 2