Purification Lysozyme

 comme ceux venant de l’extérieur ou encore les émotions. Nous allons  donc maintenant nous demander ce qui compose les divers types de larmes étudiés  précédemment par plusieurs expériences.      (Mathilde Morcet­Lamarche)  II­ Les Expériences  (​ Le lysozyme, appelé également muramidase, est une enzyme possédant la capacité de  détruire la paroi cellulaire des bactéries)        (Betty Sabarly)  III­ la composition    Comme nous l’avons dit précédemment, il y a plusieurs types de larmes : les larmes 

Compte rendu de TP Purification de lysozyme I/ But Le but de ce TP est la purification de lysozyme, une enzyme qui se localise dans le blanc d’œuf. Pour ce faire, nous allons procéder en trois grandes étapes : 1) Dans un premier temps, nous utiliserons la chromatographie d’échanges d’ions pour séparer les constituants de notre mélange. 2) Dans un deuxième temps, nous

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

IV. Propriétés de la α lactalbumine : * le gène de l’alpha-lactalbumine est connu sous le nom du gène LALBA, elle   présente 50% d’homologie avec la structure du lysozyme ainsi, elle possède une activité de lyse des parois des bactéries à Gram+, elle dériverait donc de la duplication d’un gène ancestral du lysozyme.( Prager et Wilson 1998) * interagir avec des membranes lipidiques et les traversé. * Son pouvoir émulsifiant est moindre par rapport au autre protéine du lait, néanmoins

------------------------------------------------- Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH. (NB: pGEX est en réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction

Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH, avec pGEX est en réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment

carboxyméthyls chargés négativement aux pH suivants : 1 ; 4,76 ; 7 et 9 (on considérera que le pKa du groupement carboxyl des radicaux carboxyméthyls est 4,76). 2 - Parmi les protéines suivantes : Ovalbumine (pHi = 4,6), Cytochrome c (pHi = 10,65) et Lysozyme (pHi = 11), quelles sont celles qui sont retenues par la CM-cellulose à pH 7 ? (On considérera que les interactions protéine-CM-cellulose sont uniquement d'ordre électrostatiques).À pH = 1 : = pH - pKa = 1 - 4,76 = -3,76 donc : = 1,74 10-4 Sachant

SEPARATION ET D’ANALYSE DES ACIDES NUCLÉIQUES 1.Purification des acides nucléiques 1.1.Extraction des ADN 1.2.Extraction des ARN 1.3.Extraction des 1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose 2.2.Electrophorèse sur gel de polyarylamide 3.Elaboration de Cartes de restrictions des 1.Purification des acides 1.1.Extraction nucléiques de

P10 II Matériels et Méthodes----------------------------------- P14 II.1. Purification des recombinants de l’OVAX----- P14 II.1.A. Préparation préliminaire des solutions tampons----------- P14 II.1.B. Purification par chromatographie d’exclusion HR100 -----P15 II.1.C. Purification par chromatographie d’échange d’anions (QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17 II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine sépharose)-----------------------------------------------------------------