Purification Du Lysozyme

I/ Introduction : Le lysozyme est une protéine globulaire de 129 AA. C'est une hydrolase acide secrétée par les granulocytes et les monocytes, appartenant à la famille des O-glycosyl hydrolases. Il est retrouvé chez les mammifères dans différentes secrétions (urine, salive, larme, lait), dans le sérum et dans le blanc d’œuf où il permet la nutrition du poussin en développement. Le lysozyme détruit la paroi bactérienne en catalysant l'hydrolyse des peptidoglycanes de cette dernière et constitue

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

IV. Propriétés de la α lactalbumine : * le gène de l’alpha-lactalbumine est connu sous le nom du gène LALBA, elle   présente 50% d’homologie avec la structure du lysozyme ainsi, elle possède une activité de lyse des parois des bactéries à Gram+, elle dériverait donc de la duplication d’un gène ancestral du lysozyme.( Prager et Wilson 1998) * interagir avec des membranes lipidiques et les traversé. * Son pouvoir émulsifiant est moindre par rapport au autre protéine du lait, néanmoins

------------------------------------------------- Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH. (NB: pGEX est en réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction

Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH, avec pGEX est en réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment

carboxyméthyls chargés négativement aux pH suivants : 1 ; 4,76 ; 7 et 9 (on considérera que le pKa du groupement carboxyl des radicaux carboxyméthyls est 4,76). 2 - Parmi les protéines suivantes : Ovalbumine (pHi = 4,6), Cytochrome c (pHi = 10,65) et Lysozyme (pHi = 11), quelles sont celles qui sont retenues par la CM-cellulose à pH 7 ? (On considérera que les interactions protéine-CM-cellulose sont uniquement d'ordre électrostatiques).À pH = 1 : = pH - pKa = 1 - 4,76 = -3,76 donc : = 1,74 10-4 Sachant

SEPARATION ET D’ANALYSE DES ACIDES NUCLÉIQUES 1.Purification des acides nucléiques 1.1.Extraction des ADN 1.2.Extraction des ARN 1.3.Extraction des 1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose 2.2.Electrophorèse sur gel de polyarylamide 3.Elaboration de Cartes de restrictions des 1.Purification des acides 1.1.Extraction nucléiques de

P10 II Matériels et Méthodes----------------------------------- P14 II.1. Purification des recombinants de l’OVAX----- P14 II.1.A. Préparation préliminaire des solutions tampons----------- P14 II.1.B. Purification par chromatographie d’exclusion HR100 -----P15 II.1.C. Purification par chromatographie d’échange d’anions (QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17 II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine sépharose)-----------------------------------------------------------------

Purification et dosage de la phosphatase alcalinePurification et dosage de la phosphatase alcaline Dimère de la phosphatase alcaline d E.coli Table des matières Fiche de synthèse I. Genèse du projet ................................................................................................................. 1 II. Présentation du matériel et des méthodes ........................................................................... 2 II. 1. Estimation de la quantité de protéines par méthode

coli cultivée à 37°C dont le milieu de culture est éliminé par centrifugation. Le culot bactérien obtenu est ensuite resuspendu dans une solution I qui contient entre autres de l’EDTA et du lysozyme. L’EDTA permet de chélater les cations divalents (Mg2+ et Ca2+) afin d’éviter l’activation des DNases, et le lysozyme permet la digestion des parois bactériennes en coupant les liaisons du peptidoglycane. On ajoute ensuite la solution II contenant du NaOH qui augmente le pH et dénature l’ADN chromosomique