Purification Lactate Déshydrogénase

Lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme présente dans une grande diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP

Lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme présente dans une grande diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP

COMPTE RENDU N°1, ENZYMOLOGIE : La lactate déshydrogénase, purification partielle par chromatographie d’affinité But : Purifier la lactate déshydrogénase. Nous disposons d’un extrait de tissu bovin fœtal. Purification partielle sur gel de bleu de Cibacron et mesure de l’activité enzymatique 1ère étape : Vérifier la présence de l’enzyme dans notre tissu. Réaction d’oxydation du lactate (dans les mitochondries) : Lactate + NAD + Pyruvate + NADH,H+ Si notre

 La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme tétramérique catalysant la conversion réciproque du pyruvate et du lactate accompagnée de la conversion simultanée du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de deux types de sous-unités différents M et H, et pouvant s'associer en cinq isoenzymes différentes. Le but de ce TP est de purifier la LDH, ici de façon partielle, au moyen d'une chromatographie d'affinité en colonne. Le principe de la chromatographie d'affinité repose sur

rendu TP : La lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d’affinité Différentes entreprise utilisent de nombreuses protéines dans divers domaines tels que la cosmétiques, la production de facteurs de croissance, l’agronomie... A l’origine une protéine n’est jamais seul dans l’organisme dont elle est produite, d’où la nécessité de pouvoir la purifier selon diverses méthodes plus ou moins similaire. Nous allons nous intéresser ici à la lactate déshydrogénase (LDH) qui est

mitochondries (F3), l’ensemble du système endomembranaire (F4) et le cytosol contenant les protéines solubles (F5). Lors du TP, les différentes fractions ont été soumises à différents dosages d’activités enzymatiques telles que l’activité de lactate déshydrogénase, l’activité de la glucose-6-phosphatase, l’activité de la cytochrome C oxidase. Ces dosages nous ont permis de mettre en évidence la localisation subcellulaire de l’enzyme dosée. Ce TP nous a permis de définir ce qu’est une enzyme marqueur

(transformation). b) Cofacteurs : Pour que la réact° est lieu il ft des cofacteurs qui se fixent ds le site actif pr améliorer la réaction. Exemple :  la Créatine Phosphokinase (CPK) présente ds les muscles, le cœur et le cerveau,  La Lactate Déshydrogénase (LDH) ds le cœur, les muscles et l’erythrocyte. 2) Les facteurs : a) Les facteurs endogènes :  La température : une température optimale, càd où la vitesse de la réact° chimiq augmente, existe pour l’activité enzymatique. L’intervalle

limite de 4 points sur 40 Une patiente souffre d’hépatite C non traitée ainsi que de troubles cardiaques. Le médecin lui prescrit un ensemble d’analyses comprenant entre autre un dosage de l’albumine et une détermination de l’activité de la lactate déshydrogénase. 1. Dosage colorimétrique de la serumalbumine par le vert de bromocresol : 26 points 1.1. Principe : L'albumine-Kit permet le dosage colorimétrique de la sérumalbumine. A pH 4.2, l'albumine se combine au vert de bromocrésol pour former un

LA LACTATE DÉSHYDROGÉNASE La lactate déshydrogénase ou LDH est une enzyme qui catalyse la réaction suivante : L-lactate + NAD⁺ <==> pyruvate + NADH + H⁺ Cette réaction permet pour la plupart des mammifères et des bactéries de faire de la fermentation lactique soit la réoxydation des cofacteurs (ici NADH,H⁺) en anaérobiose. Objectif : L'objectif de ce travail pratique est de purifier une protéine, en l'occurrence la LDH mais de façon partielle à partir d’un extrait cellulaire

1. But du TP L’objectif de ce TP est de purifier une solution contenant de nombreuses protéines afin de récolter l’enzyme lactate déshydrogénase et déterminer son activité spécifique. 2. Principe La lactate déshydrogénase (LDH) est l’enzyme catalysant la réaction : L-lactate + NAD+ Pyruvate + NADH + H+ Elle existe sous 5 formes rmes d’isoenzymes qui différent par leur pH isoélectrique. ➢ Chromatographie d’affinité Afin de la purifier un extrait de tissu fœtal bovin contenant