Purification Et Stabilité De La Thrombine

déroule en grandes parties, la première est la purification de la prothrombine à l’aide de la précipitation au BaCl2 te de la chromatographie échangeuse d’ions , la deuxième partie à pour but de tester la stabilité de la thrombine par dénaturation à l’urée et fluorométrie. Dans cette première partie, nous avons mis en évidence la forte présence de thrombine dans le plasma, puis après précipitation et centrifugation nous avons constaté la présence de thrombine dans les culots et son absence dans les surnageants

Compte rendu du TP de Structure et Fonction des Protéines (BIO71). Purification et Stabilité de la Thrombine. Résumé: Ce TP a pour but de purifier et de tester la stabilité de la thrombine, enzyme de la coagulation sanguine. La purification de la prothrombine comporte normalement 3 étapes: précipitation au chlorure de baryum, dialyse et chromatographie échangeuse d'ions. Au cours de ce TP, nous avons pu réalisé que 2 de ces étapes: la précipitation et la chromatographie car l'étape de

Structure et fonctions des protéines 1 Purification de la thrombine I . Résumé La prothrombine est le précurseur de la thrombine, protéinase qui initie la dernière étape de la cascade de coagulation du sang par dégradation du fibrinogène en fibrine. Le but de ce tp est de tester la stabilité de la thrombine. Pour cela nous allons réaliser 2 étapes de purification de la prothrombine issue du plasma de sang de cheval. La première étape consiste à séparer la prothrombine du plasma. Cette

ensuite clivée en thrombine, ou facteur IIactivé (IIa), par le facteur Stuart activé ( Xa ) . La thrombine est une glycoprotéine de la famille des sérine-protéases . Cette enzyme protéolytique bicaténaire est l'élément central du système de coagulation du sang. La thrombine va alors permettre de transformer le fibrinogène en fibrine, d'activer les plaquettes par les récepteurs PAR et donc de permettre au sang de se coaguler. Cette transformation de la prothrombine en thrombine peut aussi se faire

PREAMBULE : La prothrombine (ou le Facteur II) est une chaîne polypeptidique précurseur de la thrombine (ou le Facteur IIa), protéinase qui initie la dernière étape de la cascade de coagulation du sang par dégradation du fibrinogène en fibrine (voir figure 2). Le TP propose de réaliser 2 des 3 principales étapes de purification de la prothrombine issue du plasma de sang de cheval. Un test enzymatique coloré (chromogénique) vous permettra de suivre spécifiquement cette activité. Sang citraté (non

les techniques courantes de broyage. L’extraction et la purification suivent alors le même protocole. 2. L’ADN des procaryotes Le schéma de la figure I.2 résume les différents étapes de l’extraction et de la purification de l’ADN d’Escherischia coli, la bactérie la plus utilisée pour les analyses en biologie moléculaire. La lyse cellulaire utilise ici une enzyme : le lysozyme qui permet de dégrader la membrane cellulaire. La purification suit le même schéma que pour celle de l’ADN des eucaryotes

initier la production de chémokines. C'est le cas de l'hypoxie, de l'ischémie-reperfusion, de la coagulation et des radiations ; il en est de même pour de nombreux médiateurs directement impliqués dans l'inflammation comme le monoxyde d'azote, la thrombine, la tryptase, l'élastase, l'anaphylatoxine C5a, les leucotriènes B4 ou l'histamine, générant ainsi une boucle d'entretien du processus inflammatoire. Il existe près d’une cinquantaine de cytokines de faible poids moléculaire (8-12 kDa) présentant

contractiles et du mouvement: (myosine, actine, tubuline , etc) - Protéines de transport dans le sang (transferrine, hémoglobine, myoglobine) ou au travers de membranes cellulaires - Protéines protectrices: (Anticorps ou immunoglobulines, fibrinogène, thrombine) - Protéines de réserve: (ovalbumine, glycinine, gliadine, zéine) - Protéines toxiques: pour l’homme (toxines botuliniques, staphylococciques, venins de serpents, de scorpion, ricine) ou pour les microorganismes (bactériocines, antibiotiques)

d’origine animale (souvent du sérum de foetus bovin) qui apporte des facteurs d’attachement au support (fibronectine) et des facteurs de croissance (EGF, FGF, insuline ...). Les cellules sont cultivées à 37 °C en présence de CO2 qui favorise la stabilité du pH en s’équilibrant avec les tampons dissous. On isole les cellules à partir d’un tissu, du sang, de la moelle osseuse ou d’une tumeur. Pour dissocier les cellules d’un tissu, on utilise des enzymes qui dégradent la matrice extracellulaire (trypsine

sur la prévention des risques professionnels, la santé et la sécurité au travail et la protection de l’environnement Partielle à Totale • Enregistrement des actions correctives (selon l’incidence sur • Vérification de l’efficacité et de la stabilité dans le les protocoles) temps des mesures de prévention Partielle • Perfectionnement et actualisation des connaissances scientifiques et technologiques, amélioration des compétences • Indexation et stockage de l’information recueillie • Transmission