Électrophorèse sur gel

des années 1970. Sommaire  [masquer]  * 1 Relation avec les autres sciences biologiques « à l'échelle moléculaire » * 2 Techniques de biologie moléculaire * 2.1 Clonage d'expressions * 2.2 Réaction en chaîne par polymérase * 2.3 Électrophorèse * 2.4 Southern blot * 2.5 Northern blot * 2.6 Western blot * 2.7 Puce à ADN * 2.8 Technologie abandonnée * 2.9 Histoire * 3 Liste de quelques biologistes moléculaires connus * 4 Notes et références * 5 Voir

50% (alourdisseur), de l’EDTA (neutralisation des DNases), ainsi que du bleu de bromophénol et du bleu de xylène de cyanol, marqueurs de suivi de la migration. I.2- Electrophorèse horizontale en gel d’agarose L’ADN plasmidique est chargé négativement : entraîné par un champ électrique, il migre vers l’anode (pôle positif). Le gel d’agarose constitue un réseau de mailles permettant de séparer des composés en fonction de leur taille ; la fourchette de séparation dépend de la concentration en agarose

Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification III. Résultats et discussion 1. Gel 1 2. Gel 2 B. Transformation bactérienne I. principes 1. la chimiocompétence 2. l’électroperméabilisation

complète ou incomplète, existant entre les allèles goûteur et non-goûteur de PTC. 1.3 Se familiariser avec des techniques modernes de biologie moléculaire : amplification en chaîne par polymérase ou ACP (couramment appelée PCR, de l’anglais) et électrophorèse sur gel d’agarose. 1.4 Analyser des résultats en tenant compte des variables non contrôlées et inévitables dans une expérimentation sur du vivant. PRÉPARATION AU LABO 1 ère séance : Lire le protocole et compléter l’Annexe 2 à l’aide de la

lysozyme présent dans le blanc d’œuf grâce à une technique de chromatographie sur colonne de carboxyméthyl cellulose, échangeuse de cations ; puis de déterminer la présence de lysozyme par un test enzymatique et enfin, sa pureté, grâce à une électrophorèse. Matériel et méthode 1) Purification du lysozyme On récupère le lysozyme dans le blanc d’œuf (car il n’est pas présent dans le jaune d’œuf) par filtration sur gaze, puis sur papier filtre. Le filtrat obtenu constitue

enzymatique, afin de déterminer le rendement de la purification ; et par dosage des protéines à l'aide de la méthode de Bradford, pour calculer le facteur de la purification) et de manière qualitative (grâce a deux tests qualitatifs et une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS). Chromatographie sur colonne de DEAE sépharose Afin de purifier partiellement la β-galactosidase de l'extrait bactérien (extrait B), on réalise une chromatographie sur résine échangeuse d'ions. Ce

d’un échantillon témoin connu. Cela concerne l’analyse de constituants chimiques porteurs de charges électriques. Cette technique peut être utilisée pour « trier » deux types de molécules : des protéines, ou des fragments d'ADN. A) ELECTROPHORESE DES PROTEINES. Les protéines sont des molécules chargées électriquement, les acides aminés constitutifs comprenant des radicaux électronégatifs et électropositifs, leur donnant des propriétés variables selon qu’ils sont placés dans des

es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques, la culture des bactéries transformées est faite dans un milieu contenant de l’ampicilline et du X-gal. Les électrophorèses permettent alors de déterminer la taille du plasmide et de l’insert lors de la digestion et des bactéries transformées. Toutefois les résultats théoriques ne sont pas souvent obtenus. INTRODUCTION Les travaux pratiques ont pour but l’application

λ2 (à 280nm)= 0.039 pour les protéines. Rapport = 1.789 Concentration = 0.071x 50 = 3.55 μg/ml Troisième Séance : Eléctrophorèse Sur Gel • Principe : Les protéines sont séparées en fonction de leur masse molaire par électrophorèse en présence de SDS sur gel de polyacrylamide de concentration uniforme dans un système à cuves verticales. • Methodologie : La Préparation du gel D’agarose à 1% : (1g agarose/ 100ml TBE ). TBE: tampon d’éléctrophorèse(Tris-borate-EDTA) Utilisé pour la migration éléctrophorique

et mobile utilisées (échange d’ions, partage en phases normale et inverse, adsorption, exclusion...), l’EC regroupe un grand nombre de modes selon la nature de l’électrolyte de séparation et du capillaire utilisé (électrophorèse de zone, électrophorèse micellaire, électrophorèse sur gel, isoélectrofocalisation, électrochromatographie). L’EC est une méthode d’analyse désormais reconnue en raison de ces qualités intrinsèques : efficacité et résolution élevées, rapidité et automatisation des séparations