Électrophorèse sur gel

Déterminer sa masse moléculaire à l'aide du graphique précédent. Existe t'il une autre méthode pour déterminer la MM ? Correction exercice 1 : 1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne (5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation : Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps

 TP de Biologie Moléculaire Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative Objectif L’objectif de ce TP est de préparer et d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’une souche d’E.coli pour établir une carte de restriction, puis de réaliser une électrophorèse en gel d’agarose afin d’isoler le fragment Eco RI/ Bam HI (wzc). Principe Préparation de l’ADN plasmidique La préparation de l’ADN plasmidique est réalisée à partir d’une souche d’E.coli cultivée à

α)-BSA β)-échantillon à étudier γ)-réactif de Bradford 7- Électrophorèse a- Définition b- Principe c- Préparation du gel polyacrylamide SDS d- Les % utilisé lors du TP e- Les solutions a préparé α)-tampon d’échantillon β)-tampon d’électrophorèse γ)-gel de séparation λ)-gel de concentration V- traitement et analyse des résultats 1- Détermination des concentrations protéiques 2- Calcul du

vecteur un plasmide pbluescript. Nous avons pu voir au cour du TP comment utiliser les techniques de clonage moléculaire via un vecteur, la digestion enzymatique avec les enzyme EcoR1 et Hind III, la transgenèse par choc thermique, l'électrophorèse sur gel d'agarose, et la minipréparation a l'aide du kit d'extraction de plasmide. Les résultat de cette expérience n'ont pas était très concluant pour ma part du fait de la sensibilité des différent dosage. En effet mes boites de pétri renfermait que 2 à

quotidiennement (l'insuline par exemple, utilisée par de nombreuses personnes). Pour réaliser ce clonage moléculaire nous avons réalisés plusieurs étapes importantes telles que la digestion enzymatique, insertion dans un vecteur de clonage (plasmide), électrophorèse, extraction de l'ADN,... Introduction : Le clonage est la multiplication en grand nombre d'un gène, d'un organise ou d'une cellule souche. Il est très important de nos jours, en effet il nous permet d'obtenir en grande quantité un gène

l'ADN obtenu peut-être insuffisant pour continuer son analyse.De plus, cette ADN peut être dégradé ou abimé par le temps. C'est pour ces raisons, que nous allons amplifier l'ADN obtenu par une méthode dite PCR. III. La méthode PCR et Electrophorèse A. PCR La réaction en chaîne par polymérase (PCR est l'abréviation anglaise de Polymerase Chain Reaction) va permettre de récupérer une très grande quantité d’ADN avec un échantillon d’ADN très faible, qu’il soit dégradé ou même ancien

UNIVERSITE HASSAN II MOHAMMEDIA-CASABLANCA Faculté des Sciences et Techniques Mohammedia Master Sciences et Techniques Spécialité : Sécurité Alimentaire et Démarche Qualité Rapport sur Estimation des lipoprotéines plasmatiques par électrophorèse sur gel de polyacrylamide Présenté par :  Mahaman M. Bassira Année universitaire 2014-2015 INTRODUCTION Les lipides étant insolubles dans l’eau

caractéristique appelée site de restriction. La digestion enzymatique se fait à 37°C pendant 1h30. Préparation du mix pour Rsal et Fokl: 5. Electrophorèse Elle se divise en deux parties : - la migration des ADN extraits et des produits de la PCR - la migration des produits de digestion enzymatiques Pour la première migration on prépare 60mL de gel à 1%. Pour ce faire, on pèse 0,6g d’agarose que l’on dilue dans 100 ml de TBE. Le tout est chauffé pour que la dilution soit

complémentarité entre le ligand (le bleu Cibacron) et la protéine (la LDH). On choisit ici d'isoler l'enzyme, LDH sur gel de Cibacron qui est analogue du NADH. D’abord, on remplit la colonne de gel de bleu Cibacron qui se fixe par covalence à une phase stationnaire poreuse à la base de la colonne. Ensuite, on fait une équilibration avec un tampon de lavage afin de mettre le gel dans des conditions les plus optimales possible. Vient ensuite la fraction de départ ou l'extrait que l'on dépose dans

contenant le plasmide est ensuite possible : il s'agit pour cela de les cultiver au sein d'un milieu contenant l'antibiotique auquel elles sont résistantes grâce au gène apporté par le plasmide. III/ Les résultats A. Digestion enzymatique et électrophorèse Les enzymes de restriction sont des enzymes capables de couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides particulière appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait un site de coupure particulier, au niveau