Électrophorèse sur gel

par leurs constantes cinétiques mais également par leurs pH isoélectriques, le monomère H étant le plus chargé négativement à pH neutre^ou alcalin. Cette dernière propriété est utilisée pour séparer les isoenzymes de la LDH par électrophorèse non dénaturante en gel de polyacrylamide. Au cours de cette manipulation, la purification partiellede la LDH sera effectuée par chromatographie d'affinité sur bleu Cibacron fixé par covalence sur une phase stationnaire poreuse. La structure du ligand est

54 2. Conditions d’expression................................................................................. 55 3. Techniques de biochimie...................................................................................... 57 A. Electrophorèse de protéines sur gel de polyacrylamide..................................... 57 1. Préparation des échantillons protéiques......................................................... 57 2. Préparation des gels de polyacrylamide et conditions de migration...

génétique  Thermocycleur  Cuve pour électrophorèse  Scan gel  Générateur  Tube PCR Thermocycleur •Le thermocycleur est composé de : 1.Bloc chauffant 2.Clavier pour la programmation des cycles. Son utilisation : Amplification de l’ADN Cuve pour électrophorèse La cuve d’électrophorèse est Composé de : 1.Cuve vertical , horizontal 2.Générateur 3.Electrode SCAN GEL •Carte mémoire pour enregistrer les données UTILISATION : •Pour visualiser le gel sous les rayon ultra violet . •Déterminer

complémentaires d’ADN sont synthétisés à partir des extrémités 3’OH libre des amorces hybridées. Électrophorèse L’électrophorèse sur gel d’agarose est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille. La méthode de l'électrophorèse est basée sur le déplacement d'ion (molécule ayant perdu leur neutralité électrique) à travers un gel de polymères, sous l'effet d'un champ électrique. En milieu basique, les fragments d’ADN sont chargés

d’affinité b- Chromatographie d’exclusion II / Etude des fractions purifiées p.7 1) Méthodes p.7 2) Résultats et discussion p.8 a – Détermination des concentrations en protéines b- Suivi de la purification III / Electrophorèse p.11 1) Méthodes p.11 2) Résultats et discussion p.13 IV / Etude cinétique p.14 1) Méthodes p.14 2) Résultats et discussion p.15 Conclusion p.18 Introduction La Lactate Déshydrogénase (LDH), est une enzyme importante dans la régulation

généralement peut donner jusqu’à 106 fragments en cas d’ADN génomique humain. Les fragments de restriction présents dans le gel sont dénaturés grâce à une solution alcaline puis transférés sur une feuille de nitrocellulose ou sur une membrane en nylon. Ce transfert se fait par blotting. Bien que tous les fragments ne soient pas séparés complètement par l'électrophorèse sur gel, un fragment individuel à l’intérieur d’une des bandes de migration peut être identifié par hybridation. Réalisation de la

digestions enzymatiques. Vous déposez ensuite vos produits de digestion sur un gel d'agarose à 1%. La photographie du gel obtenu après migration et coloration au BET correspond à la figure A. 19 1 2 3 4 5 6 7 Figure A : Profil de restriction de l'ADN plasmidique P digéré par différentes enzymes de restriction. Après digestion enzymation, les milieux de digestion sont déposés et séparés sur gel d'agarose 1%. Ils sont révélés à l'aide de bromure d'éthidium. Légende : puits

( Le phénotype à l’échelle moléculaire. Chaque hématie contient environ 300 millions de molécules d’hémoglobine. On cherche à savoir s’il existe une ou des différences au niveau de la structure des molécules d’hémoglobine. a) On réalise une électrophorèse des molécules d’hémoglobine normale Hb A et anormale Hb S : l‘exploitation des résultats de l’électrophorèse s’effectue à partir du document annexe fourni. b)la structure de l’hémoglobine Pour déterminer la structure de l’hémoglobine normale

endopeptidase, trypsine(enzyme de l’estomac), chymotrypsine -Cartes peptidique Digestion de la proteine en peptides Permet de distinguer des differences en AA dans une proteine Electrophorèse bi dimensionnelle 1- Séparation par le point isoelectrique (pl) : isoelectrofocalisation (IEF) 2- Electrophorèse en gel acrylamide bis-acrylamide (SDS-PAGE) SDS charge negativement toutes les proteines migration selon le PM. Soumission a& une charge electrique car il peut y avoir migratio ( 1 er

adultes (I-2), (II-1 et 3) ou de cellules prélevées par amniocentèse chez le fœtus (III-1). – L’ADN est ensuite traité par l’enzyme de restriction Hae III et les fragments obtenus sont soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose. – Après dénaturation de l’ADN, on transfère une empreinte (blot) du gel sur un filtre de nitrocellulose (la position des fragments d’ADN est respectée au cours de ce transfert). – Le filtre est immergé dans une solution contenant une sonde moléculaire radioactive d’ADN