Électrophorèse sur gel

nuggets des marques A et D à Les nuggets de ces deux marques comportent de la dinde. Ils ne sont donc pas 100% poulet !!! Manipulations réalisées Seconde manipulation : détection de traces de viande de dinde dans les nuggets de poulet par PCR + électrophorèse d’ADN à Consiste à détecter des traces d’ADN de dinde dans les nuggets Etape 1 : Extraction de l’ADN à partir de broyat de nuggets à Objectif : isoler l’ADN des autres constituants du nuggets (protéines, lipides, glucides…) Broyage Extrait soluble

DUDLEY Etudiant : Elise Absa NGOM Sommaire Introduction .....................................................................3 I) Matériel et méthodes 1- Purification de la stathmine …………………………………….5 2- Electrophorèse …………………………………………………………6 3- Western blot …………………………………………………………….8 4- Dosage de la tubuline ……………………………………………….8 5- Cosédimentation ……………………………………………………..9 II) Résultats et discussion 1- Purification de la stathmine ……………………………………

1. Principe général et grandeurs fondamentales La séparation des composés par électrophorèse capillaire résulte de deux mécanismes de transport, l’électromigration et l’électroosmose. 1.1 Électromigration L’électromigration résulte du déplacement d’une espèce chargée lorsqu’elle est soumise à un champ électrique. La vitesse linéaire acquise (ou vitesse électrophorétique) est alors fonction du champ électrique et de la mobilité électrophorétique de l’ion selon la relation suivante : vep

il faut extraire les plasmides (ayant intégré l’insert) par une lyse alcaline.Pour procéder ensuite à une analyse de restriction par une digestion du plasmide par EcoRI + ApaI. Si l’insert est bien intégré, 2 fragments devrait être visible dans le gel : un plus petit pour l’insert et l’autre plus gros pour le vecteur. 180 180 561 Séquence 2 1 740 180 721 Séquence 1 830 900 651 Séquence 3 L’étape qui suit a pour but de vérifier si la séquence est conforme à ce qui est attendu

tampon d'équilibration. Laisser décanter le gel (environ 15 min) et éliminer le surnageant. Remettre le gel en suspension dans 30 mL de tampon et éliminer le surnageant comme précédemment. Remettre enfin le gel une troisième fois en suspension dans 30 mL de tampon et procéder à une décantation rapide en centrifugeant la suspension pendant 2 min à 2000 g (Centrifugeuse VWR, frein position 2). Vérifier le pH de la suspension. Eliminer le surnageant, le gel est maintenant prêt à être mis en contact

relève tous les indices susceptibles de faire avancer l’enquète. Grâce à des études ballistiques, ils déterminent d’où la balle a été tirée et la taille du tireur (indice n°1). Sur un autre mur, une giclée de sang est visible. L’étude de ce sang (électrophorèse d’hémoglobines) indique que la personne blessée est atteinte de la drépanocytose (indice n°2). Madame A. n’étant pas atteinte de cette maladie, une autre personne a donc été blessée. Les enquêteurs relèvent les empreintes digitales dans l’appartement

dans l’effet transcriptionnel de l’hormone. D. La boîte b est essentielle à l’activité du promoteur. E. La boîte b pourrait être la boîte TATA. 5ème question : Cette question est associée aux questions 3 et 4. La technique de retard sur gel permet d’étudier les interactions entre ADN et protéines et, en particulier, entre les facteurs de transcription et les éléments en cis présents dans les promoteurs des gènes. Des oligodésoxynucléotides double brin mesurant généralement moins de 30

entière les régions répétitives, non codantes, qu’on veut examiner : ces régions contiennent des successions de bases (A, C, G et T) caractéristiques de chaque individu. Les fragments d’ADN sont introduits à l’une des extrémités d’une plaque de gel. 5. Le gel ne manipule pas facilement. Les fragments sont donc transférés sur une membrane de nylon, sans altération de la séquence. Puis les deux bruns des fragments de la double hélice d’ADN sont séparés. 6. La membrane de nylon est mise dans une solution

fragments linéaires et purs. Pour obtenir ces fragments nous avons commencés par la digestion des plasmides pSK et pCR-gai par deux même enzymes de restriction. Ensuite pour séparer les produits de digestion on fait une électrophorèse sur gel d’agarose, les inserts seront purifiés du gel par la suite, puis nous les avons quantifiés pour ajuster les conditions de la ligation, cette dernière se fait en présence d’enzyme de ligation pour ligaturer l’insert au vecteur, On a fait la pré-culture et la culture

nucléotides sont normalement appairés A la fin de la réaction en chaine, les fragments d’ADN de différentes tailles sont formés a travers tout les tubes à essai. Le Gel Polyacrylamide Electrophorèse est utiliser pour séquencer l’ADN, on dispose le contenu des 4 tubes a essai( 1 de Guanine, 1 de Adénine ect…) en haut de la plaque de gel, dans la quelle on vas faire passer un courant L’ADN vas se déplacer du pole négatif(en haut) jusqu’au pôle positif ( en bas ), à cause de la charge négative transmise