CLONAGE
VOLATIANA RAKOTOARIVELO
STEPHANIE TORRENTERAS
RESUME
Le clonage est l’exploitation provoquée d’un fragment d’ADN d’intérêt. L’étude se porte surtout sur les manipulations qui aboutissent a l’obtention des clones de ce fragment .Une digestion de l’ADN du bactériophage lambda et du plasmide (pBluescript) s’est faite par des enzymes de restriction au début de l’expérience afin d’obtenir plusieurs fragments à bouts cohésifs. Une ligation est réalisée entre les fragments afin d’obtenir des plasmides recombinés. C es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques, la culture des bactéries transformées est faite dans un milieu contenant de l’ampicilline et du X-gal. Les électrophorèses permettent alors de déterminer la taille du plasmide et de l’insert lors de la digestion et des bactéries transformées. Toutefois les résultats théoriques ne sont pas souvent obtenus.

INTRODUCTION
Les travaux pratiques ont pour but l’application de toutes les théories acquises. Comment ne pas s’interroger sur l’opportunité de réaliser un clonage ? Pour reproduire a l’identique en milliers, millions d’exemplaires un fragment d’ADN d’intérêt, on fait appel à un clonage cellulaire. C’est une pratique qui est considérée par analogie la division asexuée d’une cellule qui va donner d’innombrables cellules filles. L’obtention des clones fait face à plusieurs difficultés. Pour y aboutir, il est indispensable d’abord de métriser toutes les techniques durant les étapes inéluctables, puis d’analyser les résultats obtenus. Ainsi on prend conscience que tout se fait dans un ordre logique et précis. Dans le cadre de ce travaux pratique, nous avons insérer un ADN du bactériophage dans le plasmide Bluescript. Ce plasmide recombiné est ensuite introduit dans une bactérie thermo-compétentes qui vont se multiplier pour former les colonies. Encore faut-il savoir la taille des fragments. Pour cela