Électrophorèse sur gel

vont être sélectivement retenus sur la colonne, tandis que les autres composants sont très rapidement élués. Un changement de la phase mobile (pH, force ionique…) permet ensuite d’éluer les substances d’intérêts. 1°) Purification partielle sur gel de bleu Cibacron de la LDH contenue dans un extrait tissulaire Fraction non retenue Fraction de lavage Fraction E1 Fraction E2 Fraction E3 2°) Mesure de l’activité enzymatique de la LDH dans les différentes fractions

l'échantillon A est de 11,7/20=0,575μg/μl Deuxième séance : électrophorèse SDS-PAGE en conditions dénaturantes Méthode : on cherche ici à estimer la taille des protéines présentes dans l'échantillon. Nous avons tout d'abord dénaturés notre échantillon (mélange avec du solmix et chauffage de l'échantillon) Puis on a déposé sur un gel polyacrylamide, notre échantillon dénaturé. L'électrophorèse a été effectuée. La coloration du gel a par la suite été effectuée avec du bleu de coomassie. Résultat

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

souche a été isolée sur milieu gélosé additionné de Tétracycline et d’Ampicilline. De ce milieu, les cellules d’E.coli ayant intégré le plasmide recombinant ont été sélectionnées par vérification de la présence de ce plasmide à l’aide d’une électrophorèse sur gel d’agarose (Cf. Image 1). Les pistes des colonies n° 1, 2 et 4 montrent la présence du plasmide par un spot de migration. Elles seront donc utilisées pour la surproduction de l’AAL et ensuite sa purification. II Surproduction de l’AAL et

la réponse appropriée. Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde) PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 7.0 Érythropoïétine (solution concentrée d’) Limites : identifiez les pics dus aux isoformes 1 à 8 dans B. Electrophorèse capillaire de zone (2.2.47). l’électrophorégramme obtenu avec la solution à examiner, Solution à examiner. Diluez la préparation à examiner par comparaison avec l’électrophorégramme obtenu avec la avec de l’eau R de façon à obtenir une concentration

la Lp(a) et la détermination du profil lipoprotéique du sérum humain, par électrophorèse sur gel d’agarose. Les lipoprotéines sont séparées en tampon de pH 7,5 puis colorées par une solution de noir Soudan. L’excès de colorant est éliminé en milieu alcoolique. Les profils électrophorétiques peuvent être analysés qualitativement et la densitométrie donne une quantification relative de chaque zone individualisée. Chaque gel d’agarose contenu dans le kit HYDRAGEL LIPO + Lp(a) K20 est prévu pour l’analyse

lorsqu’on confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées (« blotting ») vers une feuille de nitrocellulose ou de nylon. cette feuille, découpée en lanières, permettra de tester les sérums pour rechercher les anticorps contre les différentes protéines

poids moléculaires (PM) théorique et expérimental, le % d’erreur obtenu est de 0.75%, en revers l’albumine est la protéine avec la migration la moins précise puisque le % d’erreur obtenu est de 13.2%. INTRODUCTION L’électrophorèse de protéines en gel de polyacrylamide communément appelée SDS-PAGE est sans doute une des techniques plus amplement utilisées pour caractériser des mélanges complexes de protéines, la méthode est rapide et nécessite de faibles quantités de protéine. SDS-PAGE est un type

fractions Fn, Fm comme étant les plus riches en enzyme. - 3ème partie expérimentale : série de manipulations 3. Méthodes et résultats. Suite de l’exemple : - Activité : à partir des fractions Fn, Fm, vérifier la pureté des fractions par électrophorèse (SDS-PAGE, …), suivi d’un Western-blot/révélatioon par kit ECL+ … - Détailler la méthode : choix, principe, conditions électrophorétiques, conditions de blotting, anticorps utilisés, description du kit ECL (chimioluminescence) … - Résultats