Électrophorèse sur gel

▪ Le tube gris pour la glycémie et le tube vert pour les électrolyses (recherche d’ions dans l’organisme) ont un anticoagulant solide qui est l’héparine. ▪ Le tube jaune qui est utilisé pour presque tous les types d’examens contient un gel séparateur de sérum et activateur de coagulation. ▪ Le tube rouge ou tube sec qui ne contient pas d’anticoagulant. En rapport avec les tubes, le laboratoire de la clinique médicale Le Grand Centre dispose à son sein des tubes de prélèvement

visualisés par électrophorèse sur gel d’agarose 1% (Sigma) préparé dans du tampon TAE (solution 50X : 40mM Tris ; 20mM acide acétique ; 1mM EDTA) (Thermo Scientific).. La migration a lieu durant 25 min à 100V dans un tampon Tris-AcétateEDTA en présence d’un marqueur de taille (1kb+ DNA ladder ; Invitrogen, Carlsbad, USA). Selon les résultats, les produits de PCR ou les portions du gel d’agarose contenant les fragments d’ADN d’intérêt sont purifiés selon le protocole du kit PCR Clean up – Gel extraction

Dénaturation à 95°C, 1 à 2 min Hybridation des amorces à 50-55°C, 1 à 2 min Extension des amorces à 72°C, 2 à 3 min Au bout de 30cycles -> taux d’amplification théorique de 109 Détection du fragment amplifié : visualisation directe après électrophorèse en gel d’agarose et par hybridation avec une sonde d’ acide nucléique Sensibilité : Détection d’un micro-organisme présent dans un échantillon dans un délai de quelques heures Problèmes : Contamination éventuelles en cours de manipulation. Pas de

l'électrophorèse de zone - Description des techniques sur différents supports - Conditions d'appareillage - Principales applications en Biochimie Clinique. 1.5.2 Développements récents (focalisation isoélectrique, isotachophorèse, transferts, électrophorèse capillaires, etc.) - Principales applications en Biochimie Clinique. 1.6 Méthodes chromatographiques 1.6.1 Chromatographie d'adsorption et de partage (colonne, couche mince) Principes - Conditions d'appareillage - Principales applications en Biochimie

de l'uréase.  Détermination de la nature protéique des enzymes Enzymologie 2010/2011 Pr Mohammed Bekkali Université Hassan II Casablanca 1930 Environ 80 enzymes sont isolées 1947 Début des techniques de filtration sur gel de Sephadex et électrophorèse. Et donc plus de 200 enzymes isolées. 1968 Plus de 1300 enzymes isolées. 1980 Grâce à la Chromatographie d'affinité, plus de 2000 enzymes purifiées. De nos jours , environ 3500 enzymes purifiées. Enzymologie 2010/2011 Pr Mohammed

fragment plus ou moins long du au polymorphisme de longueur des fragments de restriction. Les étapes qui suivent servent à visualiser les différents fragments d'ADN obtenus : Les fragments de restriction sont séparés selon leur taille par une éléctrophorèse en gel d'agarose. L'ADN étant chargé négativement, il migre de la cathode vers l'anode. Les fragments les plus petits sont les plus rapides. L'ADN est transféré sous forme dénaturée sur une membrane de nylon. La position relative des fragments d'ADN

mais l’enfant 1 est atteint. zone de dépôt de l’ADN sens de migration de l’ADN père mère enfant 1 enfant 2 allèle HbA allèle HbS Électrophorèse des allèles du gène codant l’hémoglobine des différents membres de la famille. Rq : L’électrophorèse est une technique de séparation des molécules selon leurs propriétés physico-chimiques en les faisant migrer dans un gel. Les différents allèles d’un gène migrent différemment, ce qui permet de les identifier. Ici, l’allèle HbS du gène codant l’hémoglobine

d'ADN spécifique par clonage de l'ADN dans une bactérie. Remarques : de nombreuses techniques peuvent être utilisées pour vérifier que le gène cloné dans un vecteur correspond à un gène d'intérêt : séquençage d'ADN, contrôle de taille par électrophorèse sur gel d'agarose, etc... 1. 2. Préparation d'une banque d'ADN à partir d'ARNm : banque d'ADNc. Le clivage de la totalité du génome d'une cellule avec une nucléase de restriction spécifique pour le clonage d'un gène est parfois qualifié de pêche

de sodium nous as permis de voir que notre chromatographie a bien fonctionnée puisqu’on retrouve uniquement de l’arginine dans l’éluat 2 qui correspond à la seconde élution. Nous aurions pu également séparer ces deux acides aminés par électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide puisque l’électrophorèse sépare en fonction de la taille et la charge des molécules. Or l’alanine et l’arginine on une taille et une charge différente.

V- Matériels et Méthodes : 11 1. Culture cellulaire 11 2. Trypsination des cellules: 11 3. Transfection: 11 4. Immunofluorescence 12 5. Techniques de manipulation de protéines 13 a. La lyse cellulaire 13 b. Électrophorèse SDS-PAGE et immunodétection des protéines (western blot) 13 VI- Résultats : 14 1- Co-localisation de la p86-AmotL1 et la myosine : 14 2- Co-localisation de la p86-AmotL-1 et le Actine F : 16 3- Effet la surexpression de la p86-AmotL-1