Électrophorèse sur gel

gène dans le mélange de fragments. Lorsque l’ADN est fragmenté, on utilise la technique du Southern Blot pour repérer le gène. Cette méthode consiste à séparer les fragments obtenus par électrophorèse en gels d’agarose puis à dénaturer l’ADN (séparation des deux brins de la double hélice) par immersion du gel dans une solution alcaline. Il faut ensuite fabriquer une sonde fluorescente ou radioactive complémentaire du gène d’intérêt et  la laisser s’hybrider avec la partie du brin d’ADN du gène

pb M III Rch 985 Rch 984 Rch 9865 Rch 9841 Rch 9813 Rch 9868 Rch 24 M.ciceri 530 pb R.meliloti M.mediterraneum R.tropici R.etli B.japonicum M III Electrophorèse sur gel polyachrylamide du 16 S amplifié Rch 981 MspI Rch 984 Rch 60 Rch 9821 Rch 9865 Rch 9815 Rch 9840 Rch 9819 100 pb Rch 985 Rch 9816 Rch 982 200 pb 800 pb Gel des profils de restriction du 16 S par MspI 2.3. L'hybridation ADN / ADN Le chauffage d'un ADN bicaténaire donne deux brins homologues à séquences complémentaires:

concentrer la bactérie et diluer les composants alimentaires. En effet, de nombreux composants alimentaires inhibent la Taq polymérase. Les étapes de préparation de l’échantillon, l’amplification génique elle-même, la détection des amplicons par électrophorèse en gel d’agarose prennent au moins un jour. Ainsi, la méthode nécessite en moyenne deux, trois jours pour sa réalisation, ce qui limite considérablement l’avantage lié à la très haute sensibilité de la PCR. D’autre part, la détection des amplicons

disposent de 300 enzymes de restrictions. On peut procédé en espérant les acides nucléiques. Ceci c’est développé en 1970 c’est l’électrophorèse où on fait migrer les molécules d’ADN sur un support avec un champs électrique. Ce support est un gel c’est le gel d’agarose (algue) mais aussi le polyacrylamide qui est synthétique. Les molécules d’ADN vont du - vers le + car on travaille a pH = 8 à 8,5 et les groupements phosphates sont ionisés. Les grosses molécules migrent moins que les petites. L’agarose

loin. La séparation est réalisée le plus souvent par chromatographie en colonne (soit d’échange ionique soit en phase inverse) et à un degré moindre par chromatographie sur couche mince, sur papier, par chromatographie en phase vapeur ou par électrophorèse (systèmes capillaires). 6.3. Ionisation, propriétés acido-basiques. Il s’agit d’une propriété essentielle qui conditionne le comportement des acides aminés en solution puis, par généralisation, celui des protéines surtout en fonction du pH

observée en particulier dans le cas des phytoplasmes responsables du dépérissement des ligneux, seul un chromosome subsisterait. non effet phytoplasmes aux États-Unis (Neimark et Kirkpatrick, 1993). Elle permet l’observation du génome entier sur gel d’électrophorèse. Cette faible taille correspond à une évolution régressive. Les organismes les plus évolués subissent en sur Parmi les bactéries, les phytoplasmes ont aussi la plus faible teneur en bases G+C (23 à 26%) comparativement aux spiroplasmes

comportent comme des polyanions et migrent vers l'anode lors d'une électrophorèse. L'électrophorèse est actuellement l'outil de base de la génétique moléculaire car elle permet de séparer des fragments d'acides nucléiques en fonction de leur taille. * remarque importante : Les molécules se déplacent dans un champ électrique uniquement parce qu'elles sont chargées mais la migration nécessite un support . Sur le plan électrique, ce support (un gel poreux) n'intervient pas, par contre, sa porosité va déterminer

l'enfant à naître [pic]   Document 3 : analyse de l'ADN par la technique de Southern-blot L'ADN est découpé en plusieurs fragments par une enzyme de restriction. Les fragments obtenus sont séparés par électrophorèse sur gel d'agarose. Les fragments d'ADN sont dénaturés par immersion du gel dans une solution alcaline: les deux brins de la double hélice se séparent. Les fragments d'ADN sont hybridés avec une sonde radioactive spécifique du gène recherché. Les sites de fixation de la sonde radioactive

reconnaissent et lient fortement le fragment constant de l’Ac. 3. Avec une petite centrifugation, on peut faire précipiter le réseau protéine-Ac-bille. On peut aussi utiliser des billes aimantées que l’on précipite avec un aimant fort. 4. Électrophorèse sur un gel dénaturant : •Le SDS confère une densité de charges – homogènes. •Le DTT (-mercaptoéthanol) : dénaturation de la protéine. 5. Coloration. Avec du bleu de comatie : on obtient 3 bandes •Une bande contenant la protéine. •Une deuxième

isolees E’I partir de cinq localités différentes de la région de Béja ont été analysées par la méthode RFLP en utilisant les simples séquences répétées (SRS). L’ADN génomique a été digke par le5 enzymes de restriction Hinfl et Rsal et siparé par électrophorèse sur gel d’agarose. L’hybridation avec les SRS du type (GATA), (CA), a permis de regrouper les 150 isola& vn 17 génotypes et classés selon leurs relations phylogénétiques. L’analyse RAPD utilisant 8 amorces decamères a permis la différenciation des