Électrophorèse sur gel

communautariste, de généraliser le dépistage à l’ensemble des nouveau-nés sans distinction d’origine. Le dépistage de drépanocytose consiste à l’identification de l’HbS. La première étape s’effectue par focalisation isoélectrique ou encore par électrophorèse bien que cette dernière technique soit moins précise et ne distingue pas l’HbS d’autres maladies présentes dans les mêmes populations. Certains laboratoires préfèrent utiliser tout d’abord une chromatographie liquide haute performance sur colonne

de prévention sera systématiquement intégrée à la réflexion. 6 6 6 6 Groupe d'experts de biotechnologies h Quantifier des biomolécules par volumétrie i Quantifier des biomolécules par spectrophotométrie. j Séparer des biomolécules par électrophorèse sur gel d’agarose ; k Séparer des biomolécules par chromatographie sur couche mince et sur colonne. l Utiliser les logiciels informatiques pour traiter les données expérimentales. m Exploiter les ressources numériques et les outils informatiques.

disulfure inter-caténaire. Cocher la/les réponse(s) exacte(s) : A. Une chromatographie par filtration sur gel et sans traitement préalable permettra de séparer ces deux protéines B. La migration en SDS-PAGE après traitement au β-mercapto-éthanol de ces deux échantillons per- mettra de visualiser une seule bande d’un poids moléculaire de 194 KDa C. L’analyse de ces deux protéines en électrophorèse bidimensionnelle sans traitement préalable per- mettra de les séparer D. Il est possible de séparer ces

corticaux de rats grâce à son activation par CREB (Yang et al, 2010). Test des comètes : Ce test consiste, après avoir lysé les cellules et soumis l’ADN marqué à un traitement dénaturant à détecter les lésions subies par électrophorèse sur gel d’agarose. En effet après cette électrophorèse, lorsque l’ADN est intact on observe une sphère (noyau) bien délimitée tandis que des lésions seront caractérisées par une trainée partant de la sphère rappelant la forme d’une comète. Dans un premier temps, les auteurs

formes) ou inactive. Les phophorylations post-traductionnelles entraînent une modification de configuration tridimensionnelle aboutissant à la liaison avec différentes protéines. Nous devrions observer 3 bandes distinctes lors de séparations sur gel d'acrylamide : la forme inactive, cytoplasmique, apparaît à 68b kDa environ tandis que celles activées, nucléaires, se trouvent à environ 95 et 120 kDa (5). La forme cytoplasmique est liée à une protéine : Keap1 (Figure 1). 9 • Le couple

analytiques Méthodes biochimiques Physiques Cytophotométrie Diffraction aux RX Cytophotométrie de flux Chimiques Fractionnement cellulaire Caractérisation Cytochimie Cytoenzymologie Immunocytochimie Ultracentrifugation Chromatographie Électrophorèse Spectrophotométrie Hybridation moléculaire 8 Étude du fonctionnement cellulaire Techniques expérimentales Cultures cellulaires Méthodes expérimentales Utilisation de marqueurs Utilisation de traceurs Micromanipulations 9

CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 Principe de la chromatographie d’exclusion stérique (CES) Phases stationnaires et phases mobiles Traitement du chromatogramme Instrumentation Domaines d’application EXERCICES CHAPITRE 8 • ÉLECTROPHORÈSE CAPILLAIRE ET ÉLECTROCHROMATOGRAPHIE 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 De l’électrophorèse de zone à l’électrophorèse capillaire Mobilité électrophorétique et flux électro-osmotique Instrumentation Techniques électrophorétiques Performances Électrochromatographie

sur le support un système de détection qui identifie les molécules et les quantifie Chromatographie d'absorption CCM chromatographie sur couche mince = phase stationnaire deux phases : une fixe = le gel de silice une mobile = élue les molécules, il s'agit d'un solvant organique qui va dissoudre les lipides DONC si les lipides sont solubles dans ce solvant, il va décrocher les lipides du support peut se faire sur colonne

après séparation des éléments figurés) : ex exploration Hémostase, Biochimie ->Tube sec.  Sérum (Plasma sans fibrinogène) ex : Electrophorèse des protéines sériques, RAI, examens sérologiques. Sang total et plasma sur EDTA. Plasma : tube sec (on peut ajouter activateur de la coag) 5. Examens répétés (diabétiques suivi de glycémie) Pour certains patients : abord veineux difficile

............................................................................................... 29 7.2 Préparation des échantillons .................................................................................................. 29 7.3 Dépôt sur gel ........................................................................................................................... 30 7.4 Transfert sur membrane ..............................................................................................