Électrophorèse sur gel

des bases ajoutées Source: wikipedia.org sens de l'electrophorèse   Réalisé sur les quatre expériences en même temps. Migration en fonction du poids des produits des 4 expériences… 19 brin « construit » : 5' vers 3' Electrophorèse sur gel lecture des bases « ajoutées »   Séquençage : méthode Sanger (1975) En résumé : Source: scq.ubc.ca 20 Séquençage : méthode Sanger (1975) Source: flickr.com © Richard Wintle 21 Séquençage : extension de la méthode

l’analyse et espérer obtenir des résultats concluants, on peut ensuite procéder à un contrôle de quantité de l’ADN extrait : deux méthodes sont actuellement couramment utilisées : la spectrophotométrie ultraviolette et l’estimation comparative sur gel d’agarose. La première méthode consiste à mesurer l’absorbance de l’échantillon d’ADN extrait et purifié pour une longueur d’onde de 620 nanomètres. En effet, c’est la longueur d’onde maximale de l’ultraviolet de la solution d’ADN obtenu. Si l’ADN

d'ADN. Les deux chromatides d'un chromosome sont reliées par le centromère. Chromatographie (n.f.) : Technique utilisée pour séparer les molécules d'un mélange. Fondée sur la migration d'un liquide ou d'un gaz (éluant) sur un support solide (papier, gel), elle sépare les molé¬cules en fonction de leurs propriétés physico¬chimiques (solubilité dans l'éluant, affinité pour le support). Chromosome (n.m.): Molécule d'ADN associée à des protéines. Les chromosomes sont des structures permanentes des cellules;

elles par des liaisons hydrogène (représentées par des pointillés sur le document 1) et forment ainsi des microfibrilles de cellulose. Les microfibrilles entrelacées forment à leur tour des fibrilles de celluloses qui sont enchâssées dans une sorte de gel constitué d’autres polysaccharides (hémicelluloses et pectines) et de protéines. Évolution de la composition de la paroi au cours du temps Le développement de la paroi accompagne la maturation de la cellule. Les cellules immatures (cellules embryonnaires

réaction. Isoenzymes : enzymes catalysant la même réaction sur le même substrat, mais ayant des structures protéiques différentes. Exemple : la LDH tétramérique possède 2 types de protomères (H et M). Il en résulte 5 isoenzymes séparables par électrophorèse (H4, H3M, H2M2, H3 et M4) La répartition des isoenzymes varie en fonction des organes (H domine dans le cœur, M dans le muscle). La plupart des enzymes = protéines Exception : certains acides ribonucléiques, les ribozymes holoprotéines (uniquement

naturelle. Deux techniques sont utilisées pour les tests urinaires: •L'iso électrophorèse est une sorte de chromatographie qui consiste à déposer l'échantillon sur une plaque électrique recouverte d'un gel. La plaque est composée de deux pôles: un positif qui attire les solutions basiques, et un autre négatif qui attire les solutions acides. En y ajoutant un courant électrique l'EPO naturelle se déplace avec le gel du coté basique (vers un pH de 3,92-4,42) alors que l'EPO synthétique se déplace

Marocaines de Microorganismes cm : centimètre CNRST: Centre National pour la Recherche Scientifique et Technique CO2: dioxyde de carbone °C: Degré celsus dATP:Désoxyadénosine Triphosphate dCTP: Désoxycitidine Triphosphate DGGE: Denaturing Gradient Gel Electrophoresis dGTP: Désoxyguanosine Triphosphate DMSO : Diméthylsulfoxyde dNTP : Désoxyribonucléotides Triphosphate DO: Densité Optique dTTP: Désoxythimidine Triphosphate °D: Degré dornic EDTA : Ethylène Diamine Tétraacétique Acid Ent. : Enterococcus

fragments, puis ligation des fragments au vecteur de clonage choisi, ici généralement un dérivé du phage lambda. Cette étape est généralement effectuée sur gel ou par centrifugation sur un gradient de densité de sucrose ou de sel (NaCl). Alternativement, l’ADN peut être isolé sur gel. La fraction désirée est alors découpée et l’ADN est isolé directement du gel. Le but est de sélectionner la fraction d'ADN dont la taille des fragments sera optimale pour le clonage. (4) Encapsidation des phages recombinants

Afin de délimiter le nombre maximal de cycles permettant d’arrêter la réaction au moment de la phase exponentielle, nous avons testé cette technique à 21 et 22 cycles sur 5 témoins normaux. Les produits de PCR sont ensuite vérifiés par électrophorèse sur gel acrylamide 8%.  La séparation et la détection des produits de PCR ont été effectuées sur l’ABI PRISM 3130XL Genetic Analyser (Applied Biosytems), après dénaturation à 95°C pendant 3 minutes. Le mélange réactionnel injecté contient 1 µl de

y a un filament d’ADN coupé en petit morceau par des enzymes de restrictions. Ces petits morceaux sont séparés dans un gel en chromatographie en fonction de leurs tailles. On transfère ce qu’il y a dans le gel sur une membrane de nitrocellulose et à partir de là le matériel génétique est à la surface de la membrane donc on peut l’étudier, y accéder facilement alors que dans le gel non. On prends une sonde marquée et pêcher une séquence particulière. - Puce à ADN : On peut étudié l’expression des