Électrophorèse sur gel

on a donc [pic] = 3. Un ARN dépourvu de protéines et de phénols a un rapport compris entre 1.9 et 2.1. Notre ARN n’a donc pas un bon degré de pureté. 3) Visualisation de l’intégrité des ARN sur gel et vérification de la sonde Cette étape consiste à faire migrer l’ARN par électrophorèse sur gel d’agarose à 0.8% afin de vérifier leur intégrité. Voici le plan de migration : | | | | |

spécifiques. Pour y parvenir, le biologiste découpe l'ADN en des zones très précises et toujours identiques au moyen d'enzymes de restriction. Il obtient alors une grande quantité de fragments de taille très variable qui sont ensuite séparés par électrophorèse  (= déplacement de particules sous l'effet d'un champ électrique) en fonction de leur longueur. L'opération se poursuit ensuite par l'utilisation de sondes (une sonde est un brin d'ADN synthétisé artificiellement) qui repèrent les séquences uniques

immunologique), vitros ECI (sérodiagnostic), Capillarys (électrophorèse), UniCap ( recherche anticorps spécifiques des allergies) | Intégra 800 et intégra 400 (biochimie du sang et des urines), ABL85 (gazométrie).Cobas e 601 (chimie des hormones), Cappilaris (électrophorèse), Architect (marqueurs cancéreux et sérodiagnostic) | personnel | 2 techniciens présents : le 1er effectue contrôles et analyses du jour. Le 2nd réalise analyses spécifiques (électrophorèse) et manuelles (syphilis), s'occupe des expéditions

10-2mol.l-1 . Electrophorèse : L'électrophorèse permet de séparer les différents constituants d'une solution en les soumettant à l'action d'un champ électrique. Le mélange à séparer est déposé sur un support convenable, poreux et imprégné de tampon capable de conduire le courant d'un pôle à l'autre. Les particules se déplacent sous l'effet du courant à des vitesses différentes, en fonction de leur taille et de leur charge électrique. La taille des mailles du support/gel d'électrophorèse a

permet de localiser la déletion à la fin au début ou au milieu du gène. C’est + utilisé que southern. PCR multiplex fluorescente semi quantitative : on utilise de la fluorescence pour l’amplification. On dépose les produits d’amplification sur un gel d’analyseur de séquence car c’est très résolutif. On connaît à la base prés la taille de l’amplification. On voit les macro-délétions et des petites délétions d’un exon. Ca ne permet de détecter que des mutations déséquilibrer gain ou perte de matériel

des polyanions et migrent vers l’anode lors d’une électrophorèse. L’électrophorèse est actuellement l’outil de base de la génétique moléculaire car elle permet de séparer des fragments d’acides nucléiques en fonction de leur taille. * Remarque importante : les molécules se déplacent dans un champ électrique uniquement parce qu’elles sont chargées mais la migration nécessite un support pour ces molécules. Sur le plan électrique, ce support (un gel poreux) n’intervient pas, par contre, sa porosité

la mise en évidence de la variabilité de la séquence nucléotidique de l’ADN génomique après digestion par des enzymes de restriction. Une multitude de fragments d’ADN de tailles variables est générée par digestion enzymatique, puis séparée sur gel d’agarose et transférée par capillarité sous forme dénaturée sur une membrane de nylon. Cette membrane est mise en contact avec une solution contenant un fragment d’ADN ou sonde qui permet de repérer, par hybridation moléculaire, des fragments

190 14.3 Electrophorese de DNA 191 14.4 Hae III (enzyme de restriction) 192 14.5 EcoR I 193 14.6 Polymorphisme de restriction 194 14.7 Polymorphisme Msp I de l�fapoA-II 195 14.8 Cartes de restriction 196 14.9 Hybridation d�fune sonde 197 14.10 Calcul de la Tm 198 14.11 Sonde hybridee 199 14.12 Sonde specifique d�fallele (ASO) 200 14.13 Southern blot 202 14.14 PCR 203 14.15 Didesoxyadenosine triphosphate 204 14.16 Reaction de sequence 206 14.17 Sequencage d�fADN 207 14.18 Gel de sequence

Techniques 3.1. Electrophorèse Technique qui permet d'observer l'ADN: On a un gel d'agarose ou de polyacrylamide. L'ADN va migrer en fonction de la charge: du pôle négatif au pôle positif (l'ADN étant chargé négativement). Si un ADN fait 1000 pb, il va migrer moins loin (et plus lentement) qu'un ADN qui fait 700 pb. NB: C'est la charge qui fait migrer l'ADN; mais la migration s'effectue en fonction du poids de la molécule d'ADN. 8 3.2. Séquençage de l'ADN Hybridation et électrophorèse sont les 2 concepts

Myohemerythrine Immunoglobuline (Domaine V) Pyruvate Kinase (Domaine 1) Pré-Albumine 49 Myoglobine (hélice α) Tétramère: Hémoglobine 50 51 Enroulements super hélicoïdaux : le Collagène 3 Hélices α 52 53 L’électrophorèse en gel de polyacrylamide, en présence de SDS 54 55 56 Spectres d’absorption des AA Aromatiques dans l’UV 57 CHAPITRE III: STRUCTURE FONCTION DES PEPTIDES ET PROTEINES 58 Protéolyse de la PréProInsuline NH2 Peptide signal A