Électrophorèse sur gel

les divers fragments sont triés en fonction de leur taille au moyen d’une technique appelée électrophorèse en gel d’agarose. Le gel d’agarose est une matière gélatineuse qui contient des pores à travers lesquelles les molécules d’ADN peuvent passer. Les fragments vont donc être placés dans de petites entailles qui se trouvent à l’extrémité d’une plaque de ce gel. Un courant électrique est appliqué au gel, ce qui amène les fragments d’ADN à passer à travers le substrat. Les fragments les plus petits

A E C Home | News | Hacking | Sciences | Technology | Ti 92 | Programming | Free articles | Links | Webmaster PURIFICATION DU LYSOZYME DE BLANC D’OEUF PAR CHROMATOGRAPHIE D’ECHANGE D’IONS ET CONTROLE DE L’HOMOGENEITE DU LYSOZYME PAR ELECTROPHORESE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRESENCE DE SDS S K E L E T O N Ä Castry Glwadys and Delbé Lionel Ä Licence de biologie générale Université des Antilles Guyane faculté des sciences Ä Travaux pratique de biochimie assuré par Th.MARIANNE PEPIN

sous une pression d’argon de 1,72.10” N/m2. Elle est centrifugée pour éliminer un léger précipité cette opéralion est durant la concentration; formé répétée deux fois et, à ce stade la pureté de la préparation est testée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide traité au dodécyl sulfate de sodium (SDS). MESURE DE L'ACTIVITÉ NITRO~NASIQUE IN VITRO La réaction est effectuée dans des flacons à pénicilline de 10 ml fermés hermétiquement par des bouchons à jupe rabattable

bonne séparation de l'albumine des autres protéines sériques par électrophorèse. Principes Plusieurs méthodes d'analyse et d'extraction ont été utilisées pour cette manipulation. Voici présenté le fonctionnement de ces différentes méthodes • Chromatographie d'affinité La chromatographie d'affinité permet l'adsorption spécifique d'une molécule que l'on cherche à séparer. Elle se présente sous forme d'une colonne dans laquelle un gel adsorbant a été inséré jouant le rôle de phase stationnaire (notons

l'agarose à bas point de fusion, car ceci évite de casser les molécules d'ADN. Celles-ci y sont digérées partiellement ou complètement par une enzyme de restriction qui génère des extrémités droites. On isole des fragments de plus de >200 kb par électrophorèse en champs alternés. Ces fragments récupérés dans des blocs d'agarose sont liés aux bras du vecteur qui sont traités à la phosphatase alcaline pour empêcher leur religation. Cette ligation a lieu après avoir fait fondre les blocs d'agarose à 68°C

TD comm cell 2020-2021.pubE������� 1 : Le virus SV40 est un virus à ADN qui infecte les singes de type Rhésus et peut provoquer l’appari)on de tumeurs. Il est u)lisé en recherche et en biotechnologie pour la créa)on de lignées cellulaires immortalisées c’est-à-dire capables de se mul)plier en culture indéfiniment. Son pouvoir immortalisant est lié à l’expression de plusieurs protéines dont l’une est appe- lée Protéine « Grand T ». Afin de comprendre le mode d’ac)on de Grand T, des expériences

laissent passer le double brin. L’hybridation dépend de la température, de la concentration et du temps. II\ Hybridation. A\ Hybridation en phase liquide. L’ADN génomique qui va être cloné est marqué radioactivement. Cette électrophorèse permet de voir la taille des brins hybridés. Remarque : Pour une même concentration d’ADN, plus le génome est petit (ou peu complexe), plus la renaturation est rapide. Dans un tube, on met 10µg/mL d’ADN, on chauffe puis on laisse refroidir

at io na 3.2 La séparation par électrophorèse des lipoprotéines sériques est réalisée pour un sujet après un repas riche en lipides (document 5). N L’électrophorèse est effectuée sur gel de polyacrylamide à pH 8,6 à 250V pendant une heure. Ba s e L’aspect des supports électrophorétiques 2 heures, 6 heures et 10 heures après la fin du repas est donné sur le document 5. La séparation des lipoprotéines par électrophorèse sur gel de polyacrylamide se fait selon la charge

(QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17 II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine sépharose)----------------------------------------------------------------- P19 2 II.2. Analyse par électrophorèse SDS-PAG --------- P21 II.3.Analyse par Western-Blot----------------------------- P27 IIIRésultats / Discussion------------------------------------ P30 III.1. Purification de l’OVAX à partir du blanc d’œuf--------------------------------------------------------------------

observations ont permis d'émettre l'hypothèse que les facteurs USF et MYC pourraient reconnaître l’élément E et agir de manière opposée sur l’expression de PIGR. Les expériences suivantes ont été réalisées pour tester cette hypothèse. -A) retard sur gel (figure 1). B) transfections (Figure 2). Le promoteur du gène PIGR contenant le motif E est inséré dans un plasmide en amont du gène de la luciférase (plasmide WT-PIGR). Le plasmide est co-transfecté dans des cellules intestinales avec un plasmide