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T D BO HMI L E C D BO O I G N R L P E IC I E I N E E IL GE E E A E C

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PURIFICATION DU LYSOZYME DE BLANC D’OEUF PAR CHROMATOGRAPHIE D’ECHANGE D’IONS ET CONTROLE DE L’HOMOGENEITE DU LYSOZYME PAR ELECTROPHORESE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRESENCE DE SDS

S K E L E T O N

Ä Castry Glwadys and Delbé Lionel Ä Licence de biologie générale Université des Antilles Guyane faculté des sciences

Ä Travaux pratique de biochimie assuré par
Th.MARIANNE PEPIN

Ä 18 janvier 2001

BUT MANIPULATION PRINCIPE PROTOCOLE EXPERIMENTAL P RFC T N U IIA I O D T R N T ND E E MIA I O E L C II C T L T U ’ T T AAYI E A V E Q V L MIU OU Q E P E A A IND L RPRT O E A S L T ND O UI O E C P O L A IEE D U R AC L N T E F L -O Y O I L WR N

PURIFICATION D ‘UNE PROTEINE LE LYSOSYME
BUT DE LA MANIPULATION La manipulation a pour objectif la purification du lysozyme (un enzyme) à partir d’un blanc d’œuf. On réalise par la même une électrophorèse sur gel de polyacrylamide pour mettre en évidence la présence du lysozyme parmis les autres protéines du blanc d’œuf. PRINCIPE

Le lysozyme représente environ 7 à 8% des protéines du blanc d’œuf et à pHi=11 , nettement supérieur à celui des autres protéine du blanc d ‘oeuf. Par conséquent la purification du lysozyme s’effectue grâce a une chromatographie échangeuse d’ions. Pour EE TO H R S E LCR P O E E N cela ,un échangeur faible de cations comme la carboxymethylcellulose est utilise car il est PEEC D SS RSNE E D charge negativement. La purification s’effectue en trois étapes: P E A A IND G LD *Une phase d’absorption qui s’effectue avec un tampon a pH=10 RPRT O U E E S P R T NA1 % E A AI O 0 A ce pH le lysozyme est encore charge positivement alors que les autres protéines de plus faibles pHi sont chargées négativement. Le lysozyme sera donc fixe a la P E A A IND G LD RPRT O U E E carboxyméthylcellulose par interaction