Isoenzyme

tétramérique catalysant la conversion réciproque du pyruvate et du lactate accompagnée de la conversion simultanée du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de deux types de sous-unités différents M et H, et pouvant s'associer en cinq isoenzymes différentes. Le but de ce TP est de purifier la LDH, ici de façon partielle, au moyen d'une chromatographie d'affinité en colonne. Le principe de la chromatographie d'affinité repose sur la complémentarité d'une protéine pour un ligand fixé sur

La lactate deshydrogénase (LDH) est un tétramère constitué de quatre sous-unités de 35 kDa. Chez les mammifères deux types différents de sous-unité existent, le type* M (pour muscle) et le type H (pour heart), ce qui correspond à cinq formes d' isoenzymes tétramériques: MH3, H4 M4, M3H, Bien que ces formes hybrides existent dans la plupart des tissus la sous-unité de type H prédomine dans le muscle cardiaque, tandis que la sous-unité de type M prédomine dans 'les tissus comme le muscle

l'enzyme -Localisation cellulaire -Signaux de localisation tissulaire ( les isoenzyme ) ex : LDH ( lactate déshydrogénase ) c'est un oligomère a 4 sous unités, on en trouve dans les muscle (M) et dans le coeur (H) Dans le coeur la LDH est essentiellement constitué de H4 et de MH3 et dans le muscle on trouve de la LDH M4 et HM3 Il existe du M2H2 qui se trouve à la fois dans le coeur et dans les muscles La LDH possède plusieurs isoenzyme, elles catalysent toutes la même réaction mais on ne les trouvent pas

la LDH. C2 : p. Une électrophorèse non dénaturante est effectuée pour séparée les isoenzymes de la LDH : H, M₃H, M₂H₂, MH₃, M₄. Le monomère H étant le plus chargé négativement à pH neutre et alcalin, leur séparation est alors possible. On obtient alors 5 formes d'isoenzymes tétramériques. L'électrophorèse nous montre 5 tâches, donc 5 protéines différentes. Nous avons donc bien toutes les isoenzymes. On constate que la plus petite tâche chez les hybrides correspond à l'isoenzyme M₄ c'est-à-dire

(donnée sous forme molaire ou autre, celle du NADH à 340 nm est de 6.22 cm2/mmol). En réarrangeant cette équation on peut facilement trouver quel est la quantité de NADH apparu (ou disparu) en fonction de la variation de l'absorption. Les isoenzymes sont des formes multiples d’enzymes provenant d’une modification génétique de la structure primaire de la protéine et catalysant une même réaction pour un organisme donné. Les isoformes présentent habituellement des paramètres cinétiques différents

d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme qui catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constances cinétiques et leurs pH isoélectriques. Introduction : Dans cette manipulation nous cherchons à séparer les différents monomères de l’enzyme tétramérique. Pour cela nous allons procéder par différents procédés

A. Régulation par modifications covalentes 10 II.B. Régulation par allostérie 11 III. MESURE DE L'ACTIVITE 13 III.A. Principe 13 III.B. Conditions expérimentales 13 III.C. Modalités de mesure 14 III.D. Résultats 15 III.E. Intérêt médical 15 IV. ISOENZYMES 15 V. COENZYMES ET VITAMINES 16 V.A. Principes et caractéristiques générales 16 V.B. Rôle métabolique 16 Ce cours fait l’objet de 2 ou 3 QCMs. I. POUVOIR CATALYTIQUE ET CINETIQUE I.A. Généralités I.A.1) Nature et rôle Les enzymes sont

(muscle) ou B (brain) Rôle dans la contraction musculaire Isoenzymes de la CK CK-MM : Dans le muscle squelettique et le cœur CK-MB : Dans le muscle cardiaque CK-BB : Dans le cerveau, prostate, foie, utérus Dans le sérum : CK-MM 95% + CK-MB 5% (CK-BB 0%) Méthodes analytiques CK totale Mesure de la CK totale : Mesure indirecte de la vitesse de formation d’ATP lorsque l’enzyme est en présence de créatine phosphate et d’ADP Isoenzymes de la CK Electrophorèse Immuno-inhibition : Mesure l’activité

diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP est de purifier la LDH (ici de façon partielle) au moyen d'une chromatographie d'affinité en colonne. Le principe de la chromatographie d'affinité repose

sur lequel agirait le paracétamol[26]. Le paracétamol n'aurait pas d'action directe sur le COX-1 et le COX-2[27], les deux formes de COX sur lesquelles agissent les AINS comme l'aspirine ou l'ibuprofène. On soupçonne l'existence d'une nouvelle isoenzyme, le COX-3, sur laquelle agirait spécifiquement le paracétamol[28] et qui expliquerait pourquoi le paracétamol réduit la fièvre et la douleur tout en étant dénué d'activité anti-inflammatoire et antiplaquettaire. Pour l'instant, cette hypothèse n'a