RASCLE Maxime 2014/2015
SIMONATA Adrien Compte rendu TP : La lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d’affinité

Différentes entreprise utilisent de nombreuses protéines dans divers domaines tels que la cosmétiques, la production de facteurs de croissance, l’agronomie... A l’origine une protéine n’est jamais seul dans l’organisme dont elle est produite, d’où la nécessité de pouvoir la purifier selon diverses méthodes plus ou moins similaire.
Nous allons nous intéresser ici à la lactate déshydrogénase (LDH) qui est une enzyme jouant un rôle essentiel dans le métabolisme du sucre mais pas seulement. Elle est peut jouer un rôle de « marqueur de souffrance » c’est-à-dire qu’une trop forte concentration dans le milieu de cette lactate peut signifier des risques d’infarctus, d’embolie, de leucémie et bien plus encore.
La lactate déshydrogénase est un tétramère constitué de quatre sous-unités de 35 kDa et catalyse la réaction suivante :

1 L lactate + NAD+ Pyruvate + NADH + H+ 2
Le but de ce TP est de purifier cette LDH à partir d’un mélange d’extrait de foie de rat en utilisant un technique de chromatographie liquide en milieu non dénaturant, plus spécifiquement une chromatographie d’affinité avec comme ligand pour fixer notre LDH un analogue du NADH qui est ici le bleu de Cibacron qui est relativement peu spécifique permettant la purification que d’un groupe de protéines : la purification de la LDH ne sera donc que partielle.

La chromatographie d’affinité :

Méthode basé sur l’utilisation d‘une phase stationnaire constituée d’un support (silice, polymère) sur lequel on a greffé un Ligand qui présente une affinité sélective pour certains