Ribonucléase

notamment dans un grand nombre de kits commerciaux. Ces derniers contiennent souvent des petites colonnes de résine chromatographique échangeuse d'ion, permettant d'améliorer la pureté de l'ADN obtenu. Pour éliminer les ARN, on ajoute fréquemment des ribonucléases qui vont hydrolyser sélectivement ces acides nucléiques, en laissant l'ADN intact. Contrôle de l'extraction Analyse sur gel d'agarose révélée au bromure d'éthidium * Par électrophorèse sur gel d'agarose, on peut analyser la présence et la taille

modifications de bases. Cette maturation n’est pas obligatoire. Après maturation on obtient l’ARN mature. On peut prendre quelques exemples comme la maturation du transcrit primaire donnant les ARNr (transcrit primaire 45 S) ou les ARNt par des ribonucléases, ou la maturation du transcrit primaire codant les ARNm. Généralement, il y a peu de modifications pour les ARNm ; beaucoup d’ARNm sont traduits en protéines alors qu’ils sont encore transcrits (Attention : il n’y a pas de noyau chez les procaryotes)

1 (situé en amont) et la formation d'une structure en lasso interne à l'intron. Ensuite, l'extrémité 3' de l'exon 1 réagit avec l'extrémité 5' de l'exon 2 permettant l'épissage des deux exons et la libération du lasso qui sera dégradé par des ribonucléases. | Figure 5B : Excision de l'intron par formation d'un lasso : le splicéosome. Le splicéosome fait appel à des facteurs spécifiques : ribonucléoprotéines contenant des petits ARN(snRNP), ribozymes (ARN ayant des propriétés catalytiques), des enzymes

chimique des R de certains acide aminé. Température, acides, bases, solvant organique, agent mutagène, métaux toxique (Mg2+, Ag+, Hg+) Polycop : Les interactions hydrophobes sont à l'origine de l'act de la molécule et de sa structure 3D. Pour la ribonucléase A, l'info nécessaire à la réalisation de la structure native est contenue dans la séquence. Ce fait n'est vérifier que pour les petites protéines. Pour les grosses et les oligomériques les interactions hydrophobes participent au repliement de

substrat. Inhibiteurs compétitifs et non compétitifs : modification Km mais pas de Vmax --> compétitif. Modification Vmax mais pas de Km --> non compétitif. 5. Importance de la structure tridimensionnelle pour l’ activité enzymatique * Expérience ribonucléase livre p 26 Les caractères de la catalyse enzymatique sont déterminés par la configuration spatiale de l’ enzyme elle-même. Comme toutes les protéines, une enzyme présente différents niveaux d’ organisation structurale : la structure primaire correspond

1 (situé en amont) et la formation d'une structure en lasso interne à l'intron. Ensuite, l'extrémité 3' de l'exon 1 réagit avec l'extrémité 5' de l'exon 2 permettant l'épissage des deux exons et la libération du lasso qui sera dégradé par des ribonucléases. 12 Figure (4B) : EXCISION DE L'INTRON PAR FORMATION D'UN LASSO : LE SPLICEOSOME. Le splicéosome fait appel à des facteurs spécifiques : ribonucléoprotéines contenant des petits ARN(snRNP), ribozymes (ARN ayant des propriétés catalytiques)

stabilisent l’ADN simple brin. B) L’ADN polymérase –ADN dépendante synthétise le brin d’ADN complémentaire. C) Une ARN-polymérase-ADN dépendante (primase) synthétise des amorces d’ARN. D) Une ADN ligase lie entre eux les fragments d’ADN. E) Une ribonucléase élimine les amorces d’ARN. 3) Parmi les propositions suivantes, indiquez celle(s) qui est (sont) exacte(s) : A) L’initiation de la transcription est sous la dépendance de la région motrice. B) La transcription est initiée au niveau de la boîte

: Polymerase Chain Reaction EDTA : Acide Ethylène Diamine Tétraacétique SDS : Dodécyl Sulfate de Sodium LB : Luria-Bertani ou Lysogeny Broth RNase : Ribonucléase ADNt : Acide Désoxyribonucléique de transfert pBR322 : plasmide Bolivar and Rodriguez 322 OGM : Organisme Génétiquement Modifié TABLE DES ILLUSTRATIONS Figure 1

absorbe dans les UV (260 nm) ==> agent intercalent (Bromure d'éthydium = BET) colorant d'acide nucléique : vert de méthyle pyronine colore l'ADN en vert, l'ARN en rose. On peut utiliser des : - désoxyribonucléases (dégrage l'ADN) - ribonucléases (dégrade l'ARN). Anticorps marqués à l'aide de traceurs. I V– Fractionnement cellulaire. Pour pouvoir étudier il faut de nombreuses cellules du même types. Obtention de cellule d'un seul type. On peut obtenir des cellules d'un seul

la souche res. Une culture de la souche sen est soumise à l’action de la streptomycine, toutes les bactéries sont tuées. On fabrique un extrait de bactéries res. Des échantillons de cet extrait sont traités par différentes enzymes : protéases, ribonucléase (RNase), désoxyribonucléase (DNase) qui détruisent respectivement les protéines, l’acide ribonucléique : l’ARN, l’acide désoxyribonucléique : l’ADN. Question 6 (6 points) Analysez les résultats expérimentaux rapportés dans ce tableau. Concluez