Ribonucléase

(réaction générale) Tampons d’incubation (restriction) EcoR I EcoR V Pvu II Hae III Pvu I Pst I Kpn I Alphabet dégénéré Ava II Hind II Hga I Mbo II Hha I Hpa I Digestion d’une séquence (Hae III) Digestion d’une séquence (Mbo II) Ribonucléase A Ribonucléase T1 Ribonucléase H Désoxyribonucléase I Nucléase BAL 31 Nucléase S1 Nuclease de mung-bean Exonucléase de phage λ Exonucléase III Chapitre 6 : 6.1 6.2 Autres enzymes β-galactosidase Protéinase K Partie II : Chapitre 7 : 7.1 7.2 Préparation

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

imposent le repliement. De plus, lorsque l'on modifie la structure moléculaire (dégradation des ponts disulfures) la structure spatiale est également modifiée En effet, lorsque il n'y a pas de liaison, la chaine de ribonucléase ne se replie quasiment pas. Repliement de la ribonucléase On a donc démontré que la structure spatiale est liée à la structure moléculaire. Néanmoins, on voit lors de la forme B que l'enzyme n'est alors plus active. Dans ce cas là, comment expliquer que la modification

BRISSON TiphaineHAMIDI Al-Hadina TP Analyse avancée des Biomolécules L3 SV BM01Étude par spectrophotométrie de la dénaturation de la ribonucléase A pancréatique bovine par un agent chaotropique chimique I. IntroductionL’objectif des expériences suivantes est d’analyser l’altération de la structure moléculaire d’une protéine monomérique, la Ribonucléase A (RNase A) sous l’influence d’un agent dénaturant, le chlorure de guanidine par une méthode spectroscopique. L’étude de la stabilité

d'applications (Northern blot, synthèse d'ADNc...). Quelque soit la procédure d'extraction utilisée, 4 étapes importantes doivent être effectuées:  - l'ouverture efficace des cellules  -la dénaturation des complexes nucléoprotéiques  -l'inactivation des ribonucléases endogènes  -la purification totale des ARN en éliminant les contaminants ADN et protéines.  Le point le plus important parmi ces 4 est l'inactivation des activités RNases endogènes qui sont libérées lors de l'ouverture des cellules | |

H+ scorbut vient problème hydroxylation de la proline Prédiction des structures secondaires Expérience d'Anfinsen travaux réalisés sur ribonucléase enzyme avec 4 liaisons dissulfures L'urée ou chlorure de guanidine rompent liaisons non covalentes Le β-mercaptoéthanol clive réversiblement les ponts dissulfures Anfinsen a dénaturée la ribonucléase par traitement au β-mercaptoéthanol dans l'urée après, p! retrouve son activité enzymatique la séquence détermine la conformation de la protéine

évoquer les conséquences des variations de la composition chimique du milieu. Prenons l’exemple de la ribonucléase, enzyme qui dégrade de façon spécifique l’ARN (acide ribonucléique). Cette enzyme est présente dans les sucs digestifs de la cavité intestinale des mammifères mais aussi dans le cytoplasme des cellules. Séquence 1 – SN12 23 © Cned – Académie en ligne Document 14 La ribonucléase de bœuf comporte 124 acides aminés dont la séquence est connue. Quatre liaisons disulfures (ponts

La structure tertiaire détermine le site actif. La ribonucléase, enzyme qui clive l’ARN, comporte 124 résidus€ a-a et 4 ponts € disulfures. Par adjonction d’urée et de β mercapto (signifie présence de soufre) éthanol, nous obtenons une pelote statistique c’est à dire sans activité enzymatique, du fait que les ponts disulfures ont été éliminés. Par dialyse, l’urée et le β mercapto éthanol sont € rejetés pour redonner la ribonucléase. Toutefois, si l’on retire l’urée dans un premier temps

le complexe stabilise par la camptothécine. Inhibiteurs De Topoisomérases 2: Epipodophyllotoxines : Etoposide VEPESIDE® Anthracyclines: (= Antibiotiques) : donaurubicine, doxorubicine. Bléomycine (=antibiotiques) Autres: Inhibiteur De la ribonucléase diphosphate réductase : l’hydroxyurée Inhibiteur De la L--‐asparaginase : Les Poisons du fuseau : Ils bloquent La cellule en mitose en se fixant a la β--‐tubuline dont la polymérisation est nécessaire a la construction du fuseau mitotique

composée d’acides aminés. | |la base du phénotype. Elles sont|pour comprendre |protéines : l’insuline et la |Notre alimentation contient des protéines, notamment la viande, le | |responsables du phénotype |l’origine de la |ribonucléase. |poisson, les œufs et le soja. Nos propres protéines sons formées à | |moléculaire, et donc induisent |fonction d’une | |partir des acides aminés issus de la digestion des aliments.