STEPHANIE CASTAGNET
CATHERINE GASCHET
L2 INFORMATIQUE OPTION BIOCHIMIE METABOLIQUE
EDOUARD CHBAT
SENDRE NOURY
L2 PCSI OPTION BIOCHIMIE METABOLIQUE

COMPTE-RENDU DE TP DE BIOCHIMIE METABOLIQUE N°3

ANNEXES : COURBES

PURIFICATION D’UNE ENZYME :
L’AMYLASE

INTRODUCTION

Tout d’abord les enzymes sont des protéines jouant un rôle de catalyseur dans les réactions chimiques. Elles accélèrent donc la vitesse de réaction sans en modifier l’équilibre.
L’amylase est une enzyme digestive classée comme saccharidase (enzyme qui brise les polysaccharides). Cette enzyme permet la digestion des sucres lents, en transformant l’amidon et le glycogène en d’autres substances complexes comme le maltose.

Au cours de ce TP, nous allons étudier les différents paramètres cinétique de cette enzyme en mesurant l’absorbance d’échantillon à diverses températures, concentrations ou en présence d’inhibiteur.

MATERIEL ET METHODES

Matériel :
Glace pillée
Pilon
Centrifugeuse

Réactifs et produit :
Tampon Acétate de Na avec un pH 4.7 constant pendant toute l'expérience
Ethanol
L’enzyme amylase extraite de flocons de blé et de salive
Le substrat est une solution d’amidon
Indicateur coloré : Di-Nitro-Salicylate (DNS), le DNS jaune est réduit en DNS rouge orangé
On peut donc suivre l'apparition du DNS au cours de la réaction en enregistrant l'absorbance du mélange réactionnel en fonction du temps.

Méthode :
Mesure de l’absorbance par spectrophotométrie à 540 nm.
Précipitation à l'éthanol.
Le principal inconvénient de cette méthode est le grand volume d'EtOH qu'on doit utiliser, au moins quatre fois celui de la solution enzymatique aqueuse. Il faut souligner en plus que la précipitation n'est pas complète, car certaines protéines sont plus ou moins solubles dans l'éthanol.

EXTRACTION ET PURIFICATION PARTIELLE DE L’AMYLASE

Rôle des différentes