Western blot

infections localisées | •Directe (mettre en évidence l’agent)−B. mallei, B. pseudomallei:•Culture, laboratoire de type L3•PCR•Indirecte (mettre en évidence la réponse immunitaire)–B. mallei, B. pseudomallei: Réaction de fixation du complémentELISAWestern Blot (test dérivé de lélectrophorése)–Malléination: test à la malléine = test intradermopalpébralou sous-cutané test+ : gonflement de l’œil, larmoiment, inflammation suppurée | Pas de vaccin•Antibiothérapie : –Morve : interdite ; abattage des animaux infectés

le taux d’anticorps et de LTC augmente. Le virus recule. - phase asymptomatique : virus latent, taux d’anticorps stable. Pas de symptômes particuliers, mais affaiblissement progressif du système immunaitaire. Séropositivité (au test Elisa ou au Western blot). - phase symptomatique : le taux de LTC et d’anticorps s’effondre. Apparition des maladies opportunistes. Les LT4 : clés de voûte du système immunitaire - Cellules issues de la moelle osseuse maturées dans le thymus. Chaque LT8 est spécifique

rate of wound closure was demonstrated as the ratio of the wound size (each day after wounding) compared with the initial wound size. A smaller wound ratio indicates faster wound closure. 2.6. Preparation of Homogenized Skin Tissue Proteins and Western Blot. Skin tissues from the wound sites were homogenized in lysis buffer (20 mM Tris-HCl (Sigma, St. Louis, MO, USA), 150 mM NaCl2 (Duksan, Gyeonggi-do, South Korea), pH7.5, 1% NP40 (Sigma), 0.5% Na-deoxycholate stock (Sigma), 1mM EDTA (Duksan), and

89 Les gènes de classe III du CMH codent pour a. Un composé de la voie alterne du complément b. HLA-C c. Le TNF a 90 Un Ac antiviral peut être détecter par : a. Inhibition de l’hémagglutination b. Réaction de fixation du complément c. Western-blot d. Immunofluorescence indirecte abcd 91 Les lymphocytes B portent des récepteurs pour a. Un antigène b. Le virus d’Epstein-Barr c. Le fragment Fc des Ig d. Le fragment C3a du complément abcd 92 Pour détecter un Ac sérique spécifique

cause de la fenêtre sérologique : temps pour que le seuil de détection des Ac soit franchi). • de faux positif si des anticorps non spécifiques du VIH s’accrochent. Il est donc nécessaire de confirmer un test positif par une autre méthode. b. Le Western Blot. On utilise des bandelettes test sur lesquelles différentes protéines (les antigènes) extraites du VIH-1 et VIH-2, ont été séparées par électrophorèse en fonction de leur masse moléculaire. Le sérum à tester est incubé au contact d’une bandelette

légères de l’Ac (environ 25kDa). •Une dernière contenant les chaînes lourdes de l’Ac (environ 50kDa). Pour avoir un meilleur résultat, on peut utiliser des protéines rendues radioactives mais la technique est compliquée. Généralement, on fait un western Blot où on révèle la protéine avec un Ac secondaire couplé à une enzyme qui, en présence de son substrat, fabrique un produit coloré. • Ac immunoprécipitant. • Ac primaire (le même). • Ac secondaire couplé à une enzyme. L’Ac secondaire amplifie

protéines pour les révéler par la technique de Western blot (réaction avec un ou plusieurs anticorps) par exemple. • De séparer des protéines sur des gels bi-dimensionnels, selon 2 paramètres : point isoélectrique (isofocalisation), puis masse molaire • De séquencer l'ADN • De déterminer la taille de fragments d'ADN • De séparer des acides nucléiques pour les analyser par la technique de Northern blot (ARN) ou de Southern blot (ADN) • D'établir le profil de restriction

-lecture : microscope à fluorescence -technique rapide mais spécificité imparfaite : interprétation subjective nécessitant observateur entraîné. -pas d’automatisation : petites séries. 3.3 Techniques d’immuno empreintes : « immuno blot » et « western blot » -permet une étude analytique de la spécificité antigénique des anticorps -support= bandelettes de nitrocellulose ou de nylon -sur lesquelles sont transférées des protéines virales fractionnées -progrès de spécificité des tests ELISA

codon d’initiation (scan de l’ARNm) Cas de l’ARNm du FGFb ? 5’ CUG CUG CUG AUG UGA 3’ Obtention de quatre proteines correspondant au FGFb 18, 21, 21.5 et 24 kDa (localisation différente, fonction différente) Analyse par Western blot anticorps anti FGFb 40 kDa 30 kDa 20 kDa F. 5 : Régulation due à la présence d’un petit ARN Exemple de la régulation du gène ompF Régulation due à un petit ARN contrôlant la traduction But : inhiber l’expression de OmpF (protéine de la

fixation, sur des fragments de tissu adjacents à ceux qui sont fixés). Cela permet d’effectuer immédiatement des coupes au cryostat autorisant un examen rapide (extemporané) ou des techniques particulières (immunohistochimie, hybridation in situ, PCR, Western blot...). Cytogénétique et culture Les prélèvements pour la culture de tissus et la cytogénétique doivent être faits rapidement et stérilement. Autres méthodes Il n’est pas rare d’effectuer, d’autre part, la congélation rapide, sans autre précaution