Western blot

LA RÉACTION DE PRÉCIPITATION 2 : EEN MILIEU GÉLIFIÉ : 2.1 IMMUNODIFUSION DOUBLE (OUCHTERLONY) 2.2 IMMUNODIFUSION LAURELL 2.3 IMMUNODIFUSION RADIALE (MANCINI) 2.3 IMMUNO ELECTRIIMMUNODIFFUSION A – IMMUNOENZYMOLOGIE TECHNIQUES DÉRIVÉS (WESTERN BLOT) TECHNIQUES DERIVES DE LIMMUNOFLUORESCENCE (CYTOMÉTRIE EN FLUX) FSC Laser Miroirs dichroïques PMT SSC Le cytomètre enregistre le comportement de la cellule quand celle-ci passe devant le laser en mesurant: 1- La diffusion de la lumière incident

• Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique ; il permet de détecter des anticorps sécrétés en réponse à une infection. • Il est utilisé pour le dépistage du SIDA avec un second test de confirmation par immuno-transfert (Western-blot) • Nous allons détecter la présence d’anticorps anti-BSA ( Bovine sérum albumine) dans le sérum d’un lapin La première étape : le « cotting » a été réalisée par le fournisseur; il s’agit de tapisser le fond des puits avec la BSA par effet électrostatique Deuxième

WESTERN BLOT PRINCIPES : Un western blot, ou immunoblot, est une méthode de biologie moléculaire qui permet la détection de protéines spécifiques sur une membrane. La technique se déroule en plusieurs étapes : des échantillons protéiques sont déposés sur un gel d’électrophorèse et sont séparés en fonction de leur poids moléculaire. Pour cela, un courant électrique est appliqué dans le gel. Plus les protéines ont une taille importante, moins elles migrent vite ; une fois que les protéines

dans différentes conditions de culture cellulaire. Deux techniques sont utilisées pour étudier la voies de MAP kinase : le Western Blot (une technique quantitative) pour montrer la présence ou non de Erk phosphorylé ou déphosphorylé et l’immunocytochimie (technique qualitative) pour mettre en évidence de Erk phosphorylé ou non dans la cellule. Matériel et méthodes 1) Western Blot a) Traitement des cellules Les cellules NIH3T3 ont été cultivées 24h en présence de DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

photométrique IV.4.1.6. Titration d’un sérum pour la recherche d’anticorps IV. dIagnostIc VIral 4. techniques diagnostiques 10 IV. Diagnostic viral > 4. techniques diagnostiques Western blot lorsqu’on confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées

- Activité : à partir des fractions Fn, Fm, vérifier la pureté des fractions par électrophorèse (SDS-PAGE, …), suivi d’un Western-blot/révélatioon par kit ECL+ … - Détailler la méthode : choix, principe, conditions électrophorétiques, conditions de blotting, anticorps utilisés, description du kit ECL (chimioluminescence) … - Résultats : électrophorégrammes, western-blot … - Synthèse : quelle fraction semble la plus pure ? - Conclusion/discussion à la partie scientifique : synthèse de l’ensemble

selective. R- est une lignée de cellules fibroblastiques n’exprimant pas IGF-1R mais possédant ERα et ERβ. La lignée cellulaire L6 (myoblastes) exprime l’ensemble des trois récepteurs étudiés. L’expression des différents récepteurs a été confirmée par Western blot. Inhibiteurs utilisés. H 1356 est un peptide analogue à IGF-1, c’est un antagoniste à IGF-1R. ICI 182,780 est un antagoniste aux récepteurs aux oestrogènes, inhibant aussi bien ER( que ER(. PD 98059 est un inhibiteur de la MAPKK. Résultats :

........................................................................................... 28 6. Morphométrie............................................................................................................................... 28 7. Western blot ................................................................................................................................. 29 7.1 Extraction protéique .....................................................................................

satellites de souris adultes et subissent une fusion pour former les myotubes contractiles lorsqu'il est exposé à une densité élevée dans un milieu de différenciation. formation de myotubes et en outre la maturation a été contrôlée visuellement et par Western blot de l'expression de la protéine de chaîne lourde de myosine, un marqueur de différenciation musculaire ( Fig. 1B ).Bien que présente dans la prolifération des myoblastes, des protéines nPTB a été pratiquement éliminée dans les myotubes différenciés