Transfection

resuspendre les cellules dans 5 mL, les compter et les remettre en culture. 7. Split ratio : ¼ à 1/5 tous les 2-3 jours. Transfection Materiel DMEM (4,5g/l glucose) + 10% FCS i 407 + 1 mM PyrNa + PS Chloroquine 25 mM stock solution CaCl2 2M (ou 2,5 M) HBS 2X Eau stérile Jour 0 : 18-24h avant transfection mettre 3,5 à 4M de cellules /10 cm plate dans 10 mL. Jour 1 : Avant transfection , enlever le milieu de culture et mettre 8mL de milieu + 8 L chloroquine ( 25 M final ) sur les cellules. Diluer

- La transfection biologique.   C’est par les propriétés des bactéries que l’on réalise la transfection biologique. Cette méthode est plus naturelle que celles que nous avons développées précédemment. Elle se déroule en cinq étapes très précises. * 1ère étape :   On introduit, tout d’abord, le gène étranger dans un plasmide (ADN bactérien). On utilise pour cela différentes enzymes, notamment la ligase ou une enzyme de restriction qui agit de la même maniè-re. Sous son action, l’ADN est incorporé

avec diffétent promoteurs Culture cellulaire transfections (minigène dans Cellules exprimant tax) extraction ARN / protèine RT-PCR (tax/actin/minigène) + gel + photo WB (tax) Effet de tax sur différents minigène avec le même promoteur Clonage minigène + paragraphe avant Développement du WB Résultats Conclusion/perspectives Sommaire : Introduction But : I. Matériel et méthode A. Transfection On appelle transfection le processus de transfert de gènes, c'est-à-dire

eucaryotes • la faible affinité des fragments d’anticorps ainsi que la quantité insuffisante des GTPases Rho endogènes pour mettre en évidence ces liaisons. Il est possible de tester la deuxième hypothèse en sur-exprimant les GTPases Rho par transfection de cellules eucaryotes avec des plasmides codant ces protéines de manière à augmenter leur concentration intracellulaire. Le but de mon stage consiste donc à purifier les scFv à partir de cultures de bactéries Escherichia coli, de valider mes

gène d’intérêt f. Les enzymes de restriction V. Méthodes p9 a. Transformation b. Transfection c. Digestion d’un plasmide d. Titration par cytométrie de flux VI. Résultats p13 a. Amplification d’un plasmide b. Amélioration de la production de vecteur lentiviraux i. Transfection ii. Titration des vecteurs lentiviraux VII. Conclusion p19 VIII. Conclusion générale p19

anti-MDR1 sur son activité d’inhibition. 2 cas étudiés: -Culture cellulaire humaine HEK 293 -Multiple lignée cellulaire humaine : KB-8-5 6 Matériels & méthodes  Synthèse de l’siARN et trempage du duplexe  Culture cellulaire  Transfection de ARNsi dans les cellules  Western Blot 7 Synthèse de l’siARN et trempage du duplexe  Synthèse siARN: Dans automate ASM-800DNA/RNA synthétiseur Utilisation de ribo et 2’-0-methylribo b-cyanocethy phosphoramides  Puis oligoribonucléotides

encore rattaché a l'organe d'origine. On trouve deux techniques différentes pour effectuer un transfert indirect : la transfection biologique et la lipotransfection. La transfection biologique : Cette méthode prend appui sur les propriétés des bactéries, elle est la plus naturelle de toute les méthodes observées. La premiere étapes de cette transfection consiste à implanter le gene d'interet dans un plasmide. Le plasmide obtenu est donc génétiquement modifié. Ensuite, on introduit

passive et conjugaison. Introduire de l'ADN dans des cellules d'eucaryotes, telles que des cellules animales, est appelétransfection. Plusieurs techniques différentes de transfection sont disponibles : transfection calcium phosphate, transfection de liposomes ou lipofection, électroporation ou encore par réactifs de transfection propriétaires tels que le Fugene ou le Genecellin. L'ADN peut alors être introduit dans les cellules en utilisant des virus ou des bactéries pathogènes comme transporteurs

étranger dans la cellule à modifier,a l'aide d'un micromanipulateur monté avec un microscope. -La biolistique qui elle consiste aà propulser le transgène dans les cellules végétales. Les techniques indirects : -La transfection biologique qui est la méthode de la transfection biologique qui utilise les propriétés de ces bactéries. C'est une méthode plus « naturelle » que les précédentes. Exemple d'OGM : Les tomates longue durée. Les tomates de longues durée, c'est les première denrée génétique

recombinée, ou recombinante, (= modifiée), qui peuvent influer par conséquent sur l'organisme. On distingue 2 grands types de modifications du patrimoine génétique: - dans l'un, les modifications induites sont transmises à la descendance grâce à la transfection (= insertion d'un ou plusieurs gènes dans le génome des cellules) des protoplastes pour les végétaux et de la cellule-oeuf pour les animaux pluricellulaires, il s'agit de la transgenèse dans son sens propre; - dans l'autre, appliqué seulement