Dosage Sucre Réducteur Dns

TP N°2 : Dosage des sucres réducteurs par le DNS • But : - Préparation d’une gamme d’étalonnage en sucre interverti. - Dosage d’un sucre non réducteur : le saccharose. • Principe du dosage par le DNS: Le DNS (3,5-acide dinitrosalicylique) à chaud et en présence de sucres réducteurs développe un produit réduit de couleur rouge-brune l’acide 3-amino-5-nitrosalicylique. La technique du DNS est un moyen de détermination de la teneur en sucres réducteurs libres présents dans

Introduction-----------------------------------------------------------------1 Extraction de l’invertase par autolysat de levure------------------------3 II. Dosage des sucres réducteurs au 3.5-dinitrosalicylate--------------------3 III. Etude de la cinétique d’hydrolyse-------------------------------------------5 IV. Dosage des protéines par la méthode de Lowry--------------------------12 V. Influence de la concentration en enzyme----------------------------------17 VI.

SOMMAIRE INTRODUCTION I- Dosage des sucres réducteurs………………………………….........4 1- But………………………………………………………………...4 2- Principe…………………………………………………………...4 3- Mode opératoire…………………………………………………..4 4- Résultats et interprétation………………………………………..6 II- Dosage de biomasse cellulaire……………………………………..7 1- But ………………………………………………………………7 2- Principe………………………………………………………….7 3- Mode opératoire…………………………………………………7 III- Réacteur en continu………………………………………………..9 1- But……………………………………………………………….9

Equation : Saccharose + eau à D-glucose + D-fructose. = Sucre inverti A savoir : Le glucose et le fructose sont des glucides réducteurs, mais quand ils sont liés comme c’est le cas dans le saccharose ils perdent leur pourvoir réducteur (la fonction réductrice étant impliquée dans la liaison osidique). Le mélange équimolaire de glucose et fructose issu de l’hydrolyse du saccharose correspond à du sucre inverti car il y a aussi inversion du pouvoir rotatoire. L’avancement de

des diholosides. Il est extrait de la betterave et de la canne à sucre. C’est un sucre non réducteur qui par hydrolyse chimique ou enzymatique, libère une molécule de glucose et une molécule de fructose, les deux oses sont des sucres réducteurs. Son pouvoir rotatoire spécifique [α]D à 20°C = +66,5; alors que le mélange obtenu par hydrolyse possède un pouvoir rotatoire global lévogyre. Ce mélange est désigné sous le nom de sucre inverti (inversion du pouvoir rotatoire). L’invertase ou β-fructosidase

peut ensuite être ajoutée. Une succession de différents rinçages est effectuée afin d’éliminer les enzymes en excès et non fixées ainsi que pour nettoyer la colonne. Des dosages de l’activité enzymatique et des protéines totales sont réalisés sur les solutions de rinçage. III. Résultats 1) Dosage des protéines Le dosage des protéines par la méthode micro-Bradford repose sur le principe d’une liaison du bleu de Coomassie aux protéines, entraînant l’apparition d’une coloration bleue quantifiable

obtenus montrent qu’une concentration en acide sulfurique de 2 % (w/v), une pression de vapeur de 1 bar et un temps de 30 minutes représente les conditions optimales d’hydrolyse de la bagasse de betterave. Dans ces conditions le maximum de sucres réducteurs a été obtenu, à partir de la composante hémicellulosique de la bagasse, avec le minimum de perte en pentoses. ✓ Remerciements : Je commence par remercier mes parents qui m’ont beaucoup aidé, et tous mes professeurs qui m’ont beaucoup

Présentation du bioréacteur 5) Le spectrophotomètre 6) Lame de Malassez 7) Le pH-mètre IV. Méthodes 1) Turbidimétrie 2) Lame de Malassez 3) Le dosage au DNS V. Suivi de croissance et production d’exopolysaccharides 1) Mercredi 2) Jeudi 3) Vendredi 4) Calcul matière sèche 5) Dosage des exopolysaccharides VI. Analyse des résultats Conclusion Introduction : Nos Travaux Pratiques longs de Fermentation ont eut lieux la semaine du 20 au 25 Février

quelques expériences de dosage de cette enzyme, ainsi d’autres expériences illustrant son mode d’action en général. I. EXTRACTION DE LA FRACTION SOLUBLE DE LA LEVURE DE BIERE GENERALITES Le saccharose est le plus répandu des diholosides, Il est extrait de la betterave et de la canne à sucre. C'est un sucre non réducteur dextrogyre ( [α]D20=+66,5°) qui par hydrolyse chimique ou enzymatique, libère un mélange équimolaire de glucose et de fructose, tous deux réducteurs. Leur pouvoir rotatoire

aldoniques : acide gluconique Polyalcools dérivés d’oses : glycérol ; sorbitol ; inositol OSES (sens strict) = Glucides simples = monosaccharides Glucides non hydrolysables DERIVES D’OSES Diholosides = disaccharides Non réducteurs : saccharose Réducteurs : maltose ; lactose ; cellobiose Oligosides = oligosaccharides Dextrines ; Gentianose ; Raffinose Formés d’un petit nombre de molécules d’oses ou dérivés Homoglycanes = polysaccharides homogènes HOLOSIDES Formés