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Méthodologie de la biologie moléculaire

627 mots 3 pages
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Méthodologies de la Biologie Moléculaire

IGM

Les enzymes de restriction
Prix Nobel de médecine et physiologie 1978
Werner Arber

Les ciseaux de la biologie moléculaire

IGM

Les enzymes de restriction
E co R I Escherichia genre espèce souche 1ère enzyme de restriction extraite de E. coli coli Ry13

Nomenclature

IGM

Les polymérases

ADN polymérase

IGM

Les polymérases

Activité exonucléase 3'

5'

Activité exonucléase 5'

3'

ADN polymérase

IGM

Les polymérases

ADN polymérase I (E. coli) Activité exonucléase 5' 3' Activité exonucléase 3' 5' Taux d'erreur X 10-6

Fragment de Klenow (E. coli)

ADN polymérase T4

ADN polymérase T7 (sequenase)

ADN polymérase Taq (T. aquaticus)

+ +

+

+

10

+

285

9

40

5

Les ADN polymérases les plus fréquemment utilisées

IGM

L'ADN ligase

Ligature d'une brêche

IGM

L'ADN ligase

Ligature de deux fragments ayant des extrémités franches

IGM

L'ADN ligase

Ligature de deux fragments ayant des extrémités cohésives

IGM

La phosphatase alcaline

IGM

La polynucléotide kinase

IGM

Electrophorèse des acides nucléiques
-

+

IGM

Le séquençage de l'ADN
Séquençage par incorporation de didésoxynucléotides Séquençage par terminaison de chaines Séquençage selon la méthode de Sanger

Prix Nobel de chimie 1980

Fred Sanger

IGM

Le séquençage de l'ADN
ADN double brin 5' 3' séparation des deux brins

3' 5'

+ amorce ADN 3' 5'

+ ADN polymérase et dNTP (dont un radioactif)

IGM

Le séquençage de l'ADN

IGM

Le séquençage de l'ADN

T

T

T

T

T

polymérisation en présence de dNTP et d'une petite quantité de ddNTP

ddA dA dA dA dA ddA dA dA dA ddA dA dA ddA dA ddA

Mélange de fragments nouvellement synthétisés qui finissent tous par ddA à des emplacements complémentaires des bases T de la matrice

IGM

Le séquençage de l'ADN

produits de la "réaction ddA" produits de

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