Lady Macbeth fait sa première apparition à l'Acte I Scène 5 lorsqu'elle reçoit une lettre de son mari lui racontant les prophéties que lui ont faites les sorcières. Dès ce moment, Lady Macbeth fait paraître sa cruauté. Elle sait que l'assassinat de Duncan est une action diabolique mais cela ne la dissuade en rien. Son esprit est infecté par l'idée que tous les biens terrestres, la richesse, le pouvoir, le bonheur matériel sont donnés à l'homme par le diable. Elle invoque les esprits dans une sorte de messe noire pour qu'ils effacent en elle toute forme de pitié et qu'ils la rendent méchante. Lady Macbeth paraît alors comme froide, cruelle et ambitieuse. L'ambition est une qualité virile, c'est pourquoi Lady Macbeth ordonne aux esprits de la désexuer, néologisme signifiant perdre sa féminité, synonyme à l'époque de faiblesse. En devenant reine, elle jouit alors du pouvoir qu'elle a, au dépend des autres.

Elle est convaincue que tuer le roi Duncan est ce qu'il y a de mieux pour elle et son mari, mais elle sait que le crime n'est pas dans la nature de Macbeth. C'est pourquoi, pour parvenir à ses fins elle se prépare à le convaincre de la suivre sur ce chemin. Cette scène est souvent comparée à la tentation d'Adam par Eve dans la Bible.

Au delà de ses airs de cruauté, Lady Macbeth est donc surtout une femme intelligente et