TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE

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CHOLESTÉROL ET LÉCITHINES DU JAUNE D’ŒUF
1. EXTRACTION
1.1. Extraction du cholestérol
On opérera sur un jaune d'œuf. Ajouter au jaune d'œuf 20 mL d'acétone ; triturer et filtrer sur filtre Büchner. Recommencer 2 fois cette extraction. Les lécithines précipitent. Mettre le résidu de filtration de côté; évaporer le filtrat sur plaque chauffante sous la hotte (attention à ne pas brûler). Ajouter au résidu d'évaporation 20 mL de solution de potasse alcoolique et procéder à une saponification pendant 15 à 20 min au bain-marie. Après refroidissement ajouter 20 mL d'éther de pétrole ( ), agiter puis après décantation éliminer la phase éthanolique et recueillir la phase éthérée. Évaporer sur plaque chauffante sous hotte ; reprendre le résidu par 2 mL de chloroforme ( , C ). La solution obtenue est une solution de cholestérol extrait du jaune d'œuf.

1.2. Extraction des lécithines
Essorer le résidu de filtration précédent entre deux feuilles de papier filtre. Reprendre ce résidu par 20 mL de chloroforme ( , C ), agiter et filtrer en recueillant le filtrat dans un ballon à saponifier. Recommencer 2 fois cette extraction. Évaporer totalement sur plaque chauffante sous hotte. On obtient alors un extrait brut de lécithines.

2. CARACTÉRISATION DU CHOLESTEROL
2.1. Réaction de Libermann
Dans un tube à essais placer : • 1 mL d'extrait chloroformique de cholestérol • 4 gouttes d'H2SO4 concentré (C ) • 2 gouttes d'anhydride acétique ( C ) Agiter doucement et observer la coloration.

2.2. Réaction de Salkowski
Dans un tube à essais placer : • 1 mL d'extrait chloroformique de cholestérol • ajouter lentement, sans mélanger, 1 mL d'H2SO4 concentré (C ) Observer la coloration à l'interphase.

3. CARACTÉRISATION DES LECITHINES
3.1. Réaction de FLORENCE (caractérisation de la choline)
A l'extrait brut de lécithine ajouter 10 mL de solution de NaOH à 10 g.L-1 et chauffer sous reflux au bain-marie pendant 20 min pour hydrolyser la