Plaque 96 puits

des fractions membranaires. Ce protocole est adapté à un méta génome utilisant E.coli comme réceptrice et un fosmide exprimant la résistance au chloramphénicol. Il est appliqué sur des clones conservés à -80°C en plaques 96 puits.. I-2. Protocole - Réaliser 4 pré cultures de chaque plaque initiale dans 150 ml de milieu 2YT en présence de chloramphénicol 12mg/ml. NB. La pré culture s’avère nécessaire pour obtenir des filtrats à effets reproductibles sur cellules eucaryotes. -Incuber 8 heures à

car elle permet de faire réagir les gliadines avec elles pour permettre de les dénombrer quantitativement. c) Une phase hétérogène est une phases composé de plusieurs phases qui ne se solubilise pas. Microplaque sensibilisé signifie que le plaque utilisée est composé d'un dépôt (ici ce sont des Ag) d) le premier lavage permet d'enlever l'excès de gliadine préalablement déposé. Le second lavage permet d'enlever l'excès de SAB (c'est a dire les molécules qui ne se sont pas fixé au gliadines

immuno-enzymatique (ELISA). Principe de l’ELISA Le principe de la réaction est le suivant : on fixe l’antigène (BSA) sur les parois d’une plaque de polystyrène à 96 puits. L’antigène s’adsorbe spontanément à pH alcalin sur le support plastique spécialement étudié. L’excès d’antigène non adsorbé est éliminé par lavages successifs. On ajoute ensuite dans chaque puits le sérum à tester aux concentrations choisies. Après une heure d’incubation, des lavages permettent d’éliminer les anticorps non fixés.

(l’anticorps secondaire anti-lapin ou souris est couplé à l’enzyme). La révélation indirecte est le plus couramment utilisée. On effectue plusieurs dilutions de l’Ag à tester. Un volume équivalent de chaque dilution est mis dans un puits d’une plaque en plastique de 96 puits. L’Ag est alors absorbé sur ce support et la quantité d’Ag absorbé est proportionnelle à la concentration de cet Ag. Dans l’étape suivante, un Ac est mis en présence de cet Ag et la liaison Ag-Ac sera visualisée par une réaction

réaliser ce test on utilise une plaque de microtitrage ELISA composés de 96 puits à fond plat. On va venir fixer sur celle-ci l’antigène. Cette technique utilise deux anticorps, le premier est spécifique de l’antigène et l’autre reconnait le complexe immun et est couplé à une enzyme qui en dégradant son substrat donne un résultat coloré qui va permettre par observation au spectrophotomètre de quantifier le nombre d’anticorps fixés. Tout d’abord on « coate » la plaque avec l’antigène ici le BSA.

bactérie a été déposé dans les puits d'une plaque de microtitration en PVC (300 µl/puits d'une solution de 1ng/ml de bactérie purifié, dans 0,1 M NaHCO3 pH 9.0) et incubé 3 heures à 20oC. La plaque a été ensuite saturée avec 100 l/puits de 10 % sérum de souris dans PBS et incubée à 4oC pour la nuit. La plaque a été ensuite lavée 5 fois avec la solution de lavage (PBS contenant 0,05 % Tween-20). Les antisérums bovins à tester a été ensuite déposés dans les puits (200 l d'une dilution 1 : 3000

le groupe. Avec les échantillons de foie et TA, nous avons réalisé : * Le dosage du glucose plasmatique : à l’aide d’un kit enzymatique « glucose RTU ». Le plasma de nos souris a été analysé à l’aide d’une gamme étalon effectuée sur une plaque de 96 puits. Ensuite on calcule la concentration de nos échantillons. * Le dosage du cholestérol plasmatique : à l’aide d’un kit enzymatique «Cholestérol RTU ». Même chose que précédemment. * Le dosage des TG plasmatiques : réalisé par un kit enzymatique

en microplaque 96 puits en utilisant les données du document n°2 et du tableau cidessous à compléter. Mesurer les protéines totales de l'extrait « EBcoli », de l'extrait « PhoAcoli » et de l'extrait « Tyrosinase-lamelles » (volumes d'essai à 50µL, prévoir un témoin de compensation échantillon pour l'essai « Tyrosinase-lamelles »). TR Etalon SAB 5mg/mL en NaCl 0,15 M NaCl 0,15 M Réactif de Gornall Protéines par tube réactionnel (q en µg) 0 200 µL 0 1 2 3 4 5 Recouvrir la plaque. Homogénéiser sur

culture cellulaire. En général, 100 à 200 μl sont inoculés dans chacun des puits d’une plaque de culture de 24 puits, 1 ml dans un tube Leighton, et 1 à 2 ml dans un flacon de 25 cm2 ; Chapitre 2.10.11. — Grippe porcine Manuel terrestre de l’OIE 2005 1221 iv) Incuber les cultures cellulaires inoculées pendant 1 à 2 h à 37°C. Quand les récipients de culture cellulaire sont ouverts à l’environnement, comme les plaques de culture, l’incubation doit être faite dans un incubateur humidifié, en présence

2:ELISA directe 6 Figure 3:ELISA indirecte 8 Figure 4:ELISA en sandwich 10 Figure 5: ELISA en double sandwich 10 Figure 6: compétition avec un antigène marqué 12 Figure 7: compétition avec un anticorps marqué 12 Figure 8: 50 plaques 129 euros 13 Figure 9:Lecteur de plaques ELISA entre 4000 et 8000 euros 14 Figure 10: Principe de la détection des anticorps anti-VIH par la méthode ELISA 16 Introduction ELISA est l'abréviation de «  Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay »ou «  essai d'immunoadsorption