Ph D Une Hydrolyse Enzymatique

VI. Influence de la concentration en substrat et détermination du type d’inhibition---------------------------------------------------------------------20 VII. Influence du pH sur la réaction enzymatique------------------------------24 VIII. Influence de la température sur la réaction enzymatique ----------------26 A. Détermination de la température optimale--------------------------26 B. Etude de la dénaturation---------------------------------------------- 28 IX. Immobilisation

essentielles pour la vie. Connaitre comment une enzyme assure la catalyse renvoie à l’élucidation de son mécanisme qui implique le contact du substrat avec l’enzyme a travers les acides aminées du site actif. D’une manière plus générale, les protéines enzymatiques sont des catalyseurs qui en agissant à des faibles concentrations, elles augmentent la vitesse des réactions chimiques, sans en modifier le résultat. A la fin de la réaction, la structure de l’enzyme se retrouve inchangée. Le suivie de la catalyse

TP n°1 : Détermination du pH optimum d’action d’une enzyme Titre : Détermination du pH optimum pour l’enzyme α-amylase en étudiant la réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH But : Montrer et déterminer la valeur d’un pH optimum spécifique à l’enzyme α-amylase. Pour se faire on étudie son activité enzymatique par spectrophotométrie dans une réaction d’hydrolyse de l’amidon à différents pH. Calcul de concentration en amidon en mol/L : Ci × Vi = Cf × Vf Vi = ((1 × 100

DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE D'UNE REACTION ENZYMATIQUE COURBE [P] = f (t) I. PAR METHODE CINETIQUE L'enzyme étudiée est la phosphatase alcaline qui catalyse l'hydrolyse des liaisons esters lorsque l'acide engagé est l'acide phosphorique mono estérifié. On utilise la cinétique d'hydrolyse du PNPP (ParaNitroPhényl Phosphate) à 20°C à pH=9,8. Le PNP (ParaNitroPhénol) est jaune en milieu alcalin. On peut donc suivre l'apparition du PNP au cours de l'hydrolyse en enregistrant l'absorbance

Cette méthode est utilisée pour révéler la présence de ce type de sucre, dit réducteur dans une solution. (Voir aussi expérience du livre p.28-29) Le tableau ci-dessous présente les résultats de l’hydrolyse de l’amidon dans différentes conditions : HYDROLYSE DE L’AMIDON Empois d’amidon + Empois d’amidon Empois d’amidon + HCL Amylase (enzyme présente dans la salive) Concentration initiale 3 g/l 0.03 g/l Concentration finale 3 g/ l 0.03 g / l Température d’action 20°C (température 100° C 37 ° C ambiante)

réaction enzymatique TP 3. Détermination des constantes cinétiques KM et Vmax d’une réaction enzymatique TP 4. Etude de l’influence du pH et de la température sur une réaction enzymatique 1 Extraction et étude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de la levure GENERALITES Le saccharose est le plus répandu des diholosides, Il est extrait de la betterave et de la 20 canne à sucre. C'est un sucre non réducteur dextrogyre ( [a ]D = +66,5° ) qui par hydrolyse chimique ou enzymatique, libère

d’une réaction enzymatique TP 3. Détermination des constantes cinétiques KM et Vmax d’une réaction enzymatique TP 4. Etude de l’influence du pH et de la température sur une réaction enzymatique 1 Extraction et étude de l’activité de la b-fructofuranosidase (invertase) de la levure GENERALITES Le saccharose est le plus répandu des diholosides, Il est extrait de la betterave et de la 20 canne à sucre. C'est un sucre non réducteur dextrogyre ( [a ]D = +66,5° ) qui par hydrolyse chimique ou enzymatique

biochimiques. Partie enzymologie Définir les termes d'enzymologie : enzyme, substrat, produit, coenzyme, activateur, inhibiteur, réaction enzymatique, propriétés et classification des enzymes (nomenclature). Rappeler la cinétique chimique, en terme de notion d'ordre d'une réaction, réactions élémentaires et complexes formées. Etudier la vitesse d'une réaction enzymatique en fonction du temps, de la concentration d'enzyme, de la concentration du substrat, en représentation graphique normale ou en double

la réalisation des phénotypes Les enzymes : des catalyseurs biologiques La spécificité enzymatique Quelques facteurs ayant une influence sur la catalyse enzymatique Cette vitesse enzymatique est variable d’une enzyme à l’autre. D’autres facteurs que la nature propre d’une enzyme peuvent avoir une influence sur la vitesse enzymatique. Toute modification de structure de la molécule modifie l’activité, enzymatique La participation des enzymes à la réalisation du phénotype B Sommaire séquence 1

substrat (molécule dont l’enzyme catalyse la transformation). Remarque : le nom d’une enzyme est souvent formé en ajoutant le suffixe « ase » au nom du substrat. b- La spécificité d’action Chaque enzyme ne catalyse qu’un seul type de réaction (hydrolyse, oxydation, polymérisation). Souvent le type d’action détermine les groupes dans lesquels sont classés les enzymes. |Exemples d’enzymes |Substrat |Réaction chimique | |Glucose oxydase