Gel Des Clivages

Exposé : le dégel des clivages Dans une perspective comparée, dans quelle mesure le déclin des clivages traditionnels amenant à parler de « dégel » entraîne t’il une restructuration du jeux politique ? « Les clivages politiques résultent de la démocratie », au sens ou l’entendait James Madison (auteur du Fédéraliste et quatrième président des Etats-Unis). Dans toute assemblée démocratique l’opinion tend à se scinder sur les choix alternatif qui lui sont proposés. L’émergence d’ensemble de choix

Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH, avec pGEX est en réalité pGEX-2T. I. Détermination de la taille de l’insert IDH I.1- Construction du plasmide pGEX-IDH L’insertion/ligation du fragment

------------------------------------------------- Expression et purification d’une protéine fusionnée à la Glutathion-S-transférase Objectif : Obtention de l’enzyme Isocitrate déshydrogénase (IDH) par purification et clivage de la protéine de fusion Glutathion-S-transférase-Isocitrate déshydrogénase (GST-IDH), exprimée par le plasmide pGEX-IDH dans la souche transformée E. coli JM103/pGEX-IDH. (NB: pGEX est en réalité pGEX-2T). I. Détermination de la taille de l’insert IDH : * Construction

de détecter un fragment de restriction dans un mélange complexe (mixture) formé de plusieurs fragments produits par clivage enzymatique entier de la totalité du génome. On peut utiliser une ou plusieurs enzymes de restriction pour réaliser ce clivage qui, généralement peut donner jusqu’à 106 fragments en cas d’ADN génomique humain. Les fragments de restriction présents dans le gel sont dénaturés grâce à une solution alcaline puis transférés sur une feuille de nitrocellulose ou sur une membrane en

la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification III. Résultats et discussion 1. Gel 1 2. Gel 2 B. Transformation bactérienne I. principes 1. la chimiocompétence 2. l’électroperméabilisation

inséré le gène de l’IDH. L’IDH recombinante exprimée est en fusion avec la glutathion-S-transférase (GST) à des fins de purification par chromatographie d’affinité sur une colonne glutathione sepharose 4B. L’IDH peut être étudiée et dosée après clivage de la protéine de fusion par la thrombine. II- Principes III- Interprétations des résultats Culture On réalise 30 mL de préculture bactérienne à partir d’une colonie isolée transformée par le vecteur pGEX-2T-IDH dans un bouillon de culture

Mise au point de la technique du PCR (amplification des gènes) par Mullis (Nobel 1993). Débuts des programmes de séquençage de génomes entiers. Les technologies et découvertes majeures regroupées sous le vocable d'ADN recombinant incluent: 1) Le clivage spécifique de l'ADN grâce à des enzymes spécifiques, les endonucléases de restriction. 2) Le séquençage rapide de fragments d'ADN permettant de connaître la séquence des gènes. 3) L'hybridation des acides nucléiques, permettant la détection de séquences

donc un analogue artificiel : L’IPTG (permet de pallier les problème de toxicité) IPTG Promoteur tac P53 MSC PGEx-5X-1 AmpR  Promoteur inductible (au cas la protéine sera toxique)  AmpR : gène de résistance à l’ampicilline  Site de clivage : facteur10 = facteur de coagulation du sang (protéase), elle reconnait e site GST et le libère la protéine d’intérêt. Chercher les meilleurs paramètres pour avoir induction maximal 1. 2. 3. 4. 5. Temps d’incubation 30’ à 4h (max) Intensité de l’induction

être utilisée de préférence à la chromatographie d’échange d’ion pour des composés fortement ionisés et solubles dans l’eau. L’appariement d’ion est actuellement systématiquement utilisé pour la chromatographie en phase inversée de peptides issus du clivage de polypeptides ou de protéines (cartes peptidiques) afin de minimiser l’effet du caractère ionique des ces peptides sur leur séparation. Le principe de l’appariement d’ions est d’ajouter à l’éluant un ion compensateur qui, en présence des ions de

(Michels) 3.Une « entreprise politique » (Weber) Section 3. A quoi servent les partis politiques ? 1.Fonctions manifestes 2.Fonctions latentes Section 4. Partis politiques et clivages sociaux 1.Des conflits sociaux aux partis politiques (Lipset et Rokkan) 2.Quatre clivages fondamentaux 3.Un « gel des clivages » ? Partie III . LES PRATIQUES DE PARTICIPATION Introduction générale : la participation politique Chapitre 6 : La participation « conventionnelle » : le vote Section