La même chambre qu’à l’acte IV. Ruy Blas, seul en scène, se lamente : ses projets se présentent mal et il envisage de se suicider. Pour ce faire, il a récupéré une fiole de poison.
La reine arrive et doit rappeler à Ruy Blas étonné que c’est lui qui l’a invitée – la lettre qu’a fait signer Don César était en fait la lettre que Don Salluste a fait rédiger à Ruy Blas à la fin de l’acte I. Ruy Blas, paniqué, comprend que la reine est en danger et somme celle-ci, perplexe, de rentrer chez elle.
L’homme masqué qui a fait entrer la reine dans la maison, en qui le spectateur reconnaît sans difficulté Don Salluste, fait son entrée sur scène. Il menace les amants de tout dévoiler de leur liaison si la reine ne signe pas une lettre qui annule son mariage avec le roi et l’unit à Ruy Blas. Le jeune homme, pour empêcher la reine de se compromettre, prend les devants et lui révèle sa véritable identité. La reine est outrée. Don Salluste se démasque et confirme les dires de Ruy Blas, qui finit par le tuer, impitoyablement, hors scène.
Ruy Blas revient et essaie d’obteni