LENDORMY Groupe B2
Emilie 21/02/15
FRÉJAVILLE
Marie

Compte rendu
TP n°3
Séparation des protéines par Electrophorèse en gel de Polyacrylamide

M. SAINT PAUL
But :

L'électrophorèse a pour but de séparer des molécules chargées au travers d'un gel (un polymère) sous l'effet d'un champ électrique. Dans ce cas-ci, il s'agira de séparer les protéines d'échantillons et de déterminer le poids moléculaire de ces différentes protéines.
Principe :

Le gel
Le gel est constitué d'un mélange d'acrylamide et de bis-acrylamide (produits neurotoxiques). En solution, ces deux composants restent liquides. L'acrylamide forme les chaînes et le bis-acrylamide ponte les chaînes d'acrylamide.
Si on ajoute du persulfate d'ammonium et du TEMED (tétra-méthyl-éthylène-diamine), on entraîne la polymérisation. Des chaînes d'acrylamide se forment et le bis-acrylamide s'intercale à l'intérieur des chaînes. Celui-ci forme des ponts entre chaque chaîne d'acrylamide et donne ainsi la structure réticulé au gel.
Le gel est donc un support réticulé qui oppose résistance à l'avancement des molécules d'autant plus grande que leur taille moléculaire est grande.
L'électrophorèse
Il s'agit d'un système PAGE (Poly Acrylamide Gel Electrophoresis) qui permet de séparer des molécules de tailles plus petites comme des protéines et de la même façon que l'agarose, en augmentant la concentration de polyacrylamide on va pouvoir accroître la résolution et donc la séparation des molécules plus petites. Comme le polyacrylamide a une forte affinité pour le verre, l'électrophorèse va se faire de façon verticale.

Il existe différentes techniques d'électrophorèse qui emploient le gel de polyacrylamide. Ici on utilisera l'électrophorèse en présence de SDS-PAGE.
Le SDS est un détergent ionique chargé négativement. Son rôle est de dénaturer les protéines (passer de la structure quaternaire à la structure primaire). L'objectif est de casser toutes les