Etude in vitro de l’hépatotoxicité du paracétamol et de l’aspirine sur les lignées HepG2 et HepaRG

But de l’expérience :
On cherche à évaluer la toxicité du paracétamol et de l’aspirine sur deux lignées hépatocytaires isolées à partir de tumeurs : - HepG2, qui n’exprime que 2 CYP (1A1 et 3A7) - HepaRG qui exprime la majorité des CYPs impliqués dans le métabolisme des médicaments

Principe :
- Paracétamol : Le paracétamol est métabolisé exclusivement et entièrement par le foie. Il forme un composé très réactif le N-acétyl-p-benzoquinonimine ou NAPQI. En cas de surdosage, le NAPQI ne pourra plus être conjugué au glutathion, et provoquera une nécrose centrolobulaire par formation d’adduits.

- Salicylate :
50% de l’aspirine est métabolisé par le foie. Le mécanisme de toxicité du salicylate n’est pas totalement compris, mais est lié à une atteinte mitochondriale conduisant à l’apoptose ou la nécrose.

Première manipulation :
Les cellules des lignées HepG2 et HepaRG sont incubées 24H en présence de concentrations croissantes de la molécule étudiée, en trois exemplaires.

- Paracétamol : A partir de la solution à 1M, on prépare une solution de 10mL à 10mM dans un milieu SVF/DMSO en prélevant 100µL de la solution mère. Le DMSO est indispensable car le paracétamol n’est pas soluble dans le milieu.
Le puits témoin ne contient que du milieu et 100µL de DMSO. Dans le premier puits, on dépose 100µL de la solution à 10mM. Dans le second puits, on dépose 100µL de cette même solution + 100µL de milieu, afin d’obtenir une concentration de 5mM. Grace à une série de dilutions au demi, on obtient au final 9 puits avec des concentrations en paracétamol allant de 0,04 à 10mM et un puits témoin n’en contenant pas, et ceci en 3 exemplaires pour chaque lignée étudiée.

- Salicylate : De la même manière on met les cellules des deux lignées en contact de milieu de concentration en salicylate allant de 2 à 50mM. La présence de DMSO n’est