Compte rendu de TP d’Immunologie :
Technique d’immunodiffusion en gel

I. Introduction
A. Objectif
L’objectif de ce TP est de pouvoir doser quantitativement et déterminer la nature d’antigènes en présence d’anticorps en utilisant pour cela respectivement les techniques de Mancini et d’Outcherlony.

B. Principe
Formation de complexes antigène-anticorps et notion de point d’équivalence
Les techniques utilisées ici reposent sur la diffusion de protéines (antigène et anticorps) dans un gel d’agarose. La migration des protéines, facilitée par les pores du gel, va permettre aux antigènes et anticorps de rentrer en contact et ainsi former des complexes stables antigènes-anticorps. La diffusion progressera jusqu’à former des complexes massifs (contenant des milliers d’antigènes et d’anticorps) qui seront emprisonnés dans le gel à cause de leur faille et seront précipitables : c’est le point d’équivalence.
Le point d’équivalence est le rapport optimal du nombre d’antigènes et anticorps polyclonaux où se forment de très longues chaines d’antigènes liés à des anticorps. En présence d’excès d’une de ces deux molécules, on accroit la proportion de complexes plus petits donc moins précipitables.
Tampon phosphate salin
Cette solution tampon aussi appelée PBS est un soluté physiologique contenant du chlorure de sodium, du phosphate disodique, du phosphate monopotassique et du chlorure de sodium dans des concentrations proche des sels du corps humain. En structurant des couches minces d’eau autour des protéines, tampon phosphate salin permet d’empêcher la dénaturation ou des changements de conformation de ces dernières. Cette solution sera utilisée à la fois pour la préparation des échantillons antigéniques et du gel d’agarose.
Gel d’agarose
L’agarose est un polymère linéaire et non chargé où alternent des résidus de galactose et d’anhydrogalactose. La gélification de l’agarose se fait formation de ponts hydrogène entres les chaînes de polymères. Les