A-GENERALITES 1- Milieux de culture pour isolement et identification biochimique des bactéries Divers milieux de culture sont de nos jours utilisés pour isoler les bactéries. Toutefois, certains milieux se rencontrent plus fréquemment en pratique que d’autres. a-Milieu Columbia Le milieu Columbia est un milieu de base de grande valeur permettant la préparation de différents milieux nutritifs spéciaux par addition de sang, d’agents sélectifs ou de produits accélérateurs de croissance. Il se prépare selon le procédé suivant : - Peser 22mg de poudre de Columbia et y ajouter 500ml d’eau distillée ; - Chauffer le mélange à la flamme vive jusqu’à ébullition ; - Embouteiller le mélange chaud; puis stériliser pendant 1h par chauffage. b-Gélose au sang frais
Constituants :
- Milieu de base : Gélose Columbia - Sang : Le plus utilisé est le sang défibriné stérile du mouton. La proportion de sang à ajouter au milieu est en général de 5à10 %.
Préparation :
- Après stérilisation de la gélose Columbia, la laisser refroidir jusqu’à une température de 45-50°C - Incorporer le sang prélevé stérilement dans le milieu Columbia et agiter pour homogénéiser le milieu (10ml de sang pour 100ml de milieu Columbia).
Intérêt :
La gélose au sang frais est un milieu permettant de rechercher les réactions d’hémolyse et de définir le type d’hémolyse (caractéristique des Streptocoques).

c- Gélose au sang cuit ou gélose au CHOCOLAT +POLYVITEX La gélose au chocolat est un milieu de base préparé de la même façon que la gélose au sang frais ; sauf qu’ici le sang est ajouté au milieu Columbia lorsqu’il est à une température d’environ 75 à 80°c.
NB : Il est important de ne pas dépasser cette température afin de ne pas détruire les facteurs de croissance thermolabiles. Toutefois les facteurs de croissance absents sont remplacés par le mélange poly vitaminique appelé « Polyvitex ». Ce