Séparation, identification et quantification des pigments des plantes
Le but de ce TP est de mettre en évidence les différents pigments présents dans les épinards. Pour cela nous allons effectuer un broyage de 5,0 g de feuilles d’épinard dans 20 mL d’acétone 90%. On place ensuite le résultat du broyage dans une ampoule à décanter et l’on y ajoute 2 mL de cyclohexane et 4mL d’eau. On observe ensuite deux phases dans l’ampoule, on cherche à récupérer la phase supérieure noire car c’est là que se trouvent les pigments. Pour cela, nous avons effectué deux lavages, c’est-à-dire que nous avons éliminé la phase inférieure, puis ajouté de l’eau. Nous avons ensuite dégazé l’ampoule et éliminé de nouveau la phase inférieure. Nous avons ensuite mis la phase noire dans un tube.
A l’aide d’une propipette, nous avons prélevé de ce tube, 4 fois 50µL que nous avons ensuite mis sur une plaque de chromatographie. Nous avons ensuite placé cette plaque dans une cuve contenant du solvant de migration composé de 3 volumes d’éther, 1 volume d’acétone et 1 volume de chloroforme pendant 5 à 10 minutes. Voici les résultats que nous obtenons :

On observe 4 taches différentes allant du jaune au gris foncé en passant par le vert. A partir de ces observations, nous avons calculé les rapports frontaux, ce qui correspond au rapport entre la valeur de la distance du pigment et la valeur de la distance du solvant.
Nous avons donc :
Pour la tâche 1, nous avons Rf1 = 3,9/5,1=0,76
Pour la tâche 2, nous avons Rf2=2,8/5,1 = 0,55
Pour la tâche 3, nous avons Rf3 = 2/5,1 = 0,39
Pour la tâche 4, nous avons Rf4= 1,1/5,1=0,22
Nous avons ensuite gratté les taches, nous avons mis les résidus dans des microtubes, nous y avons ajouté de l’acétone et secoué afin d’homogénéiser la solution. A l’œil nu, nous pouvons déjà observer des tubes de différentes couleurs, gris, jaune, vert clair et vert foncé ; couleurs présentes sur la chromatographie.
Nous avons ensuite placé nos tubes dans un spectrophotomètre