Septième Partie :
IMMUNOTECHNOLOGIE CELLULAIRE

-119-

Chapitre A: LES TECHNIQUES D'ISOLEMENT DES CELLULES DU SYSTEME
IMMUNITAIRE
La plupart des expériences effectuées, in vivo ou in vitro, par les immunologistes nécessitent des populations de lymphocytes purifiés. Les principales sources de lymphocytes sont le thymus, la rate et les ganglions périphériques. Les lymphocytes T recirculants peuvent être obtenus par cathétérisation du canal thoracique et collection du liquide lymphatique pendant quelques heures. Chez l'homme, les lymphocytes du sang périphérique sont les plus couramment utilisés. On utilise aussi les lymphocytes provenant de ganglions ou des amygdales obtenus par exérèse chirurgicale.
Plusieurs techniques sont utilisées pour séparer les lymphocytes et les sous-populations lymphocytaires: centrifugation simple ou en gradient de densité, les techniques de rosettes, l'adhérence spécifique et non spécifique, les séparations magnétiques, etc. Cependant les technologies utilisant des anticorps monoclonaux et les principes de la cytométrie de flux intégrés dans un trieur de cellules
(L'analyseur-trieur de cellules ou Fluorescence-activated cell sorter: FACS), permettent aujourd'hui d'obtenir des populations de cellules quasiment pures.

I- LA TECHNIQUE DES GRADIENTS DE FICOLL
La séparation en gradient de densité est basée sur les différences de densité existant entre les lymphocytes et les autres cellules plus denses tels que les érythrocytes et les polynucléaires. Ce principe est appliqué pour isoler la majorité des lymphocytes du sang. Un échantillon de sang complet est défibriné par agitation sur billes de verre et le coagulat obtenu est éliminé. Le sang est alors dilué dans un milieu de culture est déposé à la surface d'un tube rempli à moitié de Ficoll. Le Ficoll est centrifugé. Les globules rouges et les polynucléaires (plus denses que le Ficoll) passent à travers et sédimentent au fond du tube.
Alors que les lymphocytes et certains macrophages ont