Introduction

L’objectif de ce TP est de mettre en évidence la présence de lymphocytes B et T dans différents organes lymphoïdes d’une souris :

- Le thymus, organe lymphoïde primaire, lieu de maturation des lymphocytes T

- Les ganglions mésentériques, organe lymphoïde secondaire

- La rate, organe lymphoïde secondaire, lieu de rencontre de l’antigène avec le système immunitaire par le sang.

Après dissection de la souris et prélèvement des organes lymphoïdes, nous avons réalisé un test de viabilité des cellules présentes dans les différents organes prélevés, et ceci, grâce au bleu trypan.

Ensuite, nous avons révélé la présence des lymphocytes B et T dans les suspensions cellulaires du thymus et de la rate. Pour cela, nous avons utilisé la méthode de l’immunofluorescence c’est-à-dire le couplage d’anticorps à un marqueur fluorescent de manière directe ou indirecte (l’isothiocyanate de fluoresceine ou FITC et rhodamine ou TRITC).

1) Plan opératoire

2) Test de viabilité cellulaire

a. Observation microscopique

| |Rectangles |Moyenne |% de viabilité |
| |n°1 |n°2 |n°3 |n°4 |n°5 | | |
|Gangl|Cellu|78 |86 |90 |
|ions |les | | | |
|mésen|vivan| | | |
|tériq|tes | | | |
|ues | | | | |
| | | | | |
| | | | | |
| | | | | |

Le comptage des cellules est réalisé selon la technique suivante : parmi les cellules situées entre deux rectangles, seules celles présentes sur les lignes le bord gauche et le bord supérieur du rectangle sont prises en compte.

b. Numération cellulaire

Nombre total de cellules dans les ganglions mésentériques

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