ELECTROPHORESE SUR GEL D'AGAROSE
1. RAPPELS THEORIQUES
L'électrophorèse en gel d'agarose est une technique de base au laboratoire de biologie moléculaire. Elle est utilisée
-soit à des fins analytiques: pour séparer et identifier des fragments d'ADN, pour déterminer leur taille, pour en estimer la quantité,
-soit à des fins préparatives, pour purifier un fragment d'ADN de taille connue.
La taille des fragments qu'il est possible de séparer est comprise entre 0,2 et 50 kb.
Les fragments …afficher plus de contenu…

Le tampon TBE est le plus souvent utilisé pour les contrôles rapides mais l'ADN s'élue difficilement de ce type de gel.
Pour la récupération de fragments d'ADN on utilise de préférence le TAE.
Température
La vitesse de migration n'est pas modifiée entre 4 et 30°C: on peut donc faire migrer les gels à température ambiante. 4. Suivi de la migration et révélation
4.1. Suivi de la migration
Les échantillons d'ADN avant d'être déposés dans les puits sont mélangés avec une solution de charge qui …afficher plus de contenu…

Ce marqueur peut être soit préparé au laboratoire, soit acheté dans le commerce.
- Des marqueurs composés d'une série de fragments, chacun constitué de une à plusieurs répétitions d'un segment d'ADN de taille connue Ces marqueurs sont achetés dans le commerce. Un exemple est l'échelle d'ADN de 1 kb de GIBCO BRL les différents fragments sont formS de 1 a 12 répétitions d'un segment de 1018 pb. En plus de ces 12 fragments l'échelle contient des fragments qui varient entre 75 et 1636 pb. Ce marqueur peut être utilisé pour mesurer des fragments d ADN linéaires bicatenaires longs de 0,5 à 12