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Détermination du site actif d’un peptide synthétique par HPLC
But : Préciser la localisation dans un peptide synthétique de la zone impliquée dans son interaction avec un glycosaminoglycane naturel : l’héparine. Vous allez expérimenter une méthode d’analyse et de purification incontournable, la chromatographie en phase inversée et vous familiariser avec l’HPLC. Vous devrez comprendre ses caractéristiques (principe), ses intérêts et défauts. La bonne connaissance des propriétés des peptides et de leurs éléments constitutifs, les acides aminés, est à acquérir avant et au cours de ce TP. Méthodes : Vous allez effectuer la digestion protéolytique d’un peptide grâce à la chymotrypsine, analyser en HPLC par chromatographie en phase inversée avec appariement d’ion les fragments obtenus et tester la capacité de ces fragments à interagir avec l’héparine par chromatographie d’affinité.

ASPECT THEORIQUE, RAPPELS
Rappels sur les glycosaminoglycanes (GAG). Les glycosaminoglycanes (GAG) sont des polysaccharides anioniques largement distribués dans les tissus. Les plus communs sont l’héparine, l’héparane sulfate , le dermatane sulfate, les chondroïtines 4et 6-sulfate et l’acide hyaluronique. A l’exception de ce dernier qui existe sous forme libre, les GAGs sont des molécules polysulfatées souvent liées de manière covalente à une protéine, formant ainsi un protéoglycane. Les protéoglycanes exercent leurs fonctions au travers des interactions qu’ils peuvent établir avec d’autres protéines. Ils sont synthétisés par pratiquement tous les types cellulaires et sont impliqués non seulement dans la régulation de la cohésion de la matrice extracellulaire mais également dans des phénomènes biologiques aussi divers que le contrôle d’activités enzymatiques, de la croissance ou de la différentiation cellulaire. Rappels sur les propriétés des acides aminés et des peptides. Préparez le TP en révisant vos cours/TD concernant ces points. Insistez sur la notion de polarité puisqu’il