détermination de la masse molaire minimale d'une protéine P par Dosage de la tyrosine (méthode d'Anson)

En milieu alcalin le réactif de Folin Ciocalteu réagit avec la tyrosine en donnant une coloration bleue permettant un dosage colorimétrique.
Réactifs:
• Solution T : solution étalon de tyrosine à 250 mg/L dans HCl 0,2 mol/L • HCl 0,2 mol/L • NaOH 0,2 mol/L • Réactif de Folin Ciocalteu au 1/2: à préparer extemporanément • 3 mL de réactif pur • 3 mL d'eau

• Hydrolysat d'une protéine P : solution H à 4,20 g de protéines/L

1. Préparation d'une solution étalon fille F de tyrosine à 50 mg/L :
A partir de la solution T, préparer 50 mL d'une solution étalon de tyrosine à 50 mg/L, en utilisant la solution d' HCl 0,2 mol/L comme diluant.

2. Etalonnage de la méthode:

2.1. Gamme de solutions étalon:
A partir de la solution étalon fille F réaliser une gamme de solutions étalon de concentration allant de 0 à 50 mg/L, sous un volume final de 5 mL .

2.2.Coloration: Pour chaque solution étalon procéder de la façon suivante:

| |volumes |
|Sol. étalon |1, 00 mL |
|NaOH 0,2 mol/L |5 mL |
|Réactif de Folin Ciocalteu au 1/2 (mL) |0,5 mL |

Mélanger.
Attendre 5 minutes.
Lire les absorbances à 750 nm contre le témoin .

3. Dosage de la tyrosine dans l'hydrolysat de protéine: (2 essais)
L'hydrolysat H est obtenu par hydrolyse d'une protéine P. Un évaluation de la concentration par mesure l'absorbance à 280 nm montre que la solution contient environ 60 mg/L en tyrosine.

Diluer la solution H afin de permettre son dosage par la méthode d'Anson.

Réaliser deux essais:
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