But des manipulations de culture cellulaire : Le but de la culture cellulaire ou plutôt appelé maintenance cellulaire a été de maintenir en vie deux lignées cellulaire (balb/c 3t3 et balb/c 10.1) pendant 4 semaine à une concentration viable pour la survie des cellules. Les deux lignées cellulaires se sont développés dans un milieu sélectif favorable à leurs croissances (DMEM). Tous les 2 ou 3 jours les cellules sont détachées du fond de la boite de pétri grâce à de la trypsine 1x, les cellules sont ensuite observées sous microscope inversé afin d’apprécier la places prises des cellules dans le chant microscopique appelé confluence. Une dilution est donc réaliser ou non suivant la confluence obtenue, puis les cellules sont remises en suspension avec du DMEM. Le fait de changer le milieux de culture des cellules s’appelle le passage.
Caractéristiques des 2 lignées cellulaires :La maintenance cellulaires est réalisée sur deux lignées de cellule les balb/c 3T3 et balb/c 10.1, plus communément appelé 3T3 et 10.1. Il s’agit de fibroblastes embryonnaires de souris, très utilisées en culture cellulaires du fait de leurs nombre de divisions infinies. Morphologiquement les fibroblastes sont des cellules possédant des protubérances aux extrémités avec un renflement au niveau du noyau. Contrairement au balb/c 10.1, les cellules balb/c 3T3 possèdent dans leur génome le gène TP53 codant pour la protéine p 53 . Cette différence génétique va donc permettre de différencier les deux lignées cellulaires.
Conditions de maintenance des lignées balb/c 3T3 et balb/c 10.1 : Pour survivre les deux lignées cellulaires doivent être maintenues à des concentrations viable donc ni trop forte et ni trop faible, la confluence recherchée doit être entre 70 et 80%. Après la réalisation du passage les cellules se développent pendant 2 ou 3 jours dans un incubateur à 37oc sous 5% de CO2. Dans les deux tableaux suivants sont regroupés les dates des maintenances cellulaires ainsi que les