TP4 FLUORESCENCE : Etude de la carboxyfluoresceine par fluorescence

Introduction : La fluorescence est une émission lumineuse provoquée par l'excitation d'une molécule (en général par absorption d'un photon) qui est suivie immédiatement d'une émission spontanée. Un fluorophore est une molécule qui absorbe et émet de la lumière (différent d'un chromophore qui ne fait qu'absorber la lumière). La fluorescence est un processus spontané (différent des émissions stimulées dans les laser par exemple). De plus la fluorescence (=émission de photons) est mesurée par un spectrofluorimètre (et l'absorbance par un spectrophotomètre).
La carboxyfluorescéine est un marqueur extrinsèque, c’est-à-dire qu’elle n’est pas présente naturellement dans le milieu biologique (membranes, cellules...). Elle est très utilisée en biochimie, biophysique et biologie cellulaire comme marqueur extrinsèque dans bon nombre d’expérimentations en biologie notamment pour marquer et tracer des molécules qui n’absorbent pas. Car il possède un haut rendement de fluorescence dans le visible. Le But de ce tp est de caractériser une molécule : la carboxyfluorescéine (CF). Pour cela, nous avons étudié l'effet de paramètres physico-chimique sur la fluorescence de ce fluorophore. Puis nous avons déterminé les paramètres caractéristiques de' l'inhibition de fluorescence (quenching) par l'iodure de potassium. Le quenching est une inhibition de la fluorescence, il y a alors apparition de transitions non radiatives. Préambule : On utilise cette solution tampon A composé d'acide citrique, d'acide dihydrogénophosphate de potassium et d'acide borique car en faisant un mélange de différents acides, on crée un tampon qui ne variera pas si on ajoute d'autres substrats. Le Ph restera donc constant. Caractérisation spectrale de CF : ->Mesure du spectre d'absorption au spectrophotomètre afin de connaitre la longueur d'onde à laquelle la CF absorbe. On remarque que notre composé CF absorbe